{"html": "

а) 40 ml на 1,6 % агароза в 0,05 M Tris/HCl буфер, pH 7,2 с 8,5 % NaCl; б) 15 ml от серум на говежда левкоза, който има антитела само към вирусни гликопротеини на левкоза по говедата, разреден 1:10 в 0,05 M Tris/HCl буфер, pH 7,2 с 8,5 % NaCl; в) 15 ml на говежда левкоза серум, който има антитела само към вирусни гликопротеини на левкоза по говедата, разреден 1:5 в 0,05 M Tris/HCl буфериран, pH 7,2 с 8,5 % NaCl; г) 4 пластмасови легенчета с диаметър 85 mm; д) перфорация с диаметър от 4 до 6 mm; е) референтен антиген; ж) стандартизиран антиген; з) водна баня (56 °C).

\n

Процедура Агарозата се разтваря (1,6 %) в Tris/HCl буфер чрез внимателно нагряване до 100 °C. Поставя се на 56 °C водна баня за приблизително един час. Също така се поставят разрежданията на говеждия левкозен серум на 56 °C водна баня.

\n

След това се смесват 15 ml от 56 °C агарозен разтвор с 15 ml говежди левкозен серум (1:10), бързо се разклаща и се изсипват 15 ml в едно от двете каменни легенчета. Процедурата се повтаря с говеждия левкозен серум, разреден 1:5.

\n

Когато агарозата се втвърди, в нея се правят дупки, както следва:

\n

Добавяне на антиген а) каменни легенчета 1 и 3: клетка A - с неразреден референтен антиген, клетка Б - с 1:2 разреден референтен антиген, клетки В и Д - с референтен антиген, клетка Г - с неразреден тест антиген; б) каменни легенчета 2 и 4: клетка A - с неразреден тест антиген, клетка Б - с 1:2 разреден тест антиген, клетка В - с 1:4 разреден тест антиген, клетка Г - с 1:8 разреден тест антиген.

\n

Допълнителни инструкции 1. Експериментът се изпълнява с две серумни разреждания (1:5 и 1:10) за получаване на оптимална утайка.

\n
2.Ако диаметърът на утайката е прекалено малък и при двете разреждания, по-нататък серумът трябва да бъде разреден.
\n
3.Ако диаметърът на утайката при двете разреждания е прекалено голям и слаб, се избира по-нисък серум.
\n
4.Финалната концентрация на агароза трябва да бъде 0,8 %, този на серумите - съответно 5 и 10 %.
\n
5.Отбелязват се измерените диаметри в следващата координатна система. Разреждането на антигена се тества със същия диаметър, като референтният антиген е работното разреждане.
\n

В. Имуноензимен метод (ЕЛАЙЗА) за откриване на ензоотична левкоза по говедата 1. Материалът и реагентите, които се използват, са:

\n
a)твърдофазови микроплаки, епруветки или друга твърда фаза; б) антиген - фиксиран към твърдата фаза със или без помощта на поликлонални или моноклонални улавящи антитела; ако антигенът е директно приложен към твърдата фаза, всички тестови проби, даващи положителни реакции, се тестват отново към контролен антиген в случая на EBL. Контролният антиген следва да бъде идентичен с антигена, освен за BLV антигени; ако улавящите антитела са приложени към твърдата фаза, антителата не трябва да реагират на антигени, различни от BLV антигени; в) биологичният флуид, който се тества; г) субстрат, адаптиран към използвания ензим; д) спиращ разтвор, ако е необходимо; е) разтвори за разреждането на тестовите проби за приготвяне на реагенти и за измиване; ж) отчитаща система, подходяща за използвания субстрат.
\n
2.Стандартизация и чувствителност на теста Чувствителността на метода ЕЛАЙЗА трябва да бъде на такова равнище, че E4 серум да се точкува положително, когато е разреден 10 пъти (серум проби) или 250 пъти (проби на мляко) повече от разреждането, получено от индивидуални проби, когато са включени в пулове. При образци, където пробите (серум и мляко) са тествани индивидуално, E4 серум, разреден 1 до 10 (в отрицателен серум) или 1 до 250 (в отрицателно мляко), се точкува положително, когато е тестван в същото разреждане на образец, както е използвано за индивидуалните тест проби. Официалните институти, посочени в т. A.2, отговарят за проверката на качеството на ЕЛАЙЗА метода и по-специално за определянето за всяка производствена партида, на броя на мострите, които да бъдат обединени в пулове на база на броенето, получено за E4 серума.
\n

Серумът E4 се доставя от Националната ветеринарна лаборатория, Копенхаген.

\n
3.Условия за използване на ЕЛАЙЗА теста за EBL Методът ЕЛАЙЗА може да бъде използван върху проби на мляко или суроватка, взети от събраното мляко от ферма с най-малко 30 % от млечни крави в процес на лактация.
\n

Ако е използван този метод, се вземат мерки за взетите проби да могат да бъдат идентифицирани с животните, от които млякото или изследваните серуми са били взети.

\n

Приложение № 5 към чл. 11, ал. 1 Задължително е оповестяването на следните болести (а) Болести при говедата:

\n

Бяс Туберкулоза Бруцелоза Шап Антракс (синя пъпка) Чума при говедата Плевро-пневмония (б) Болести при свинете:

\n

Бяс Бруцелоза Антракс (синя пъпка) Шап Класическа и африканска чума по свинете Заразна парализа при свинете (болестта Teschen) Приложение № 6 към чл. 11, ал. 2 Болести, за които се изискват допълнителни гаранции Ауески Заразен ринотрахеит по говедата Бруцелоза по свинете Трансмисивен гастроентерит 39299

", "next": 0}