📄 Įstatymo tekstas
LIETUVOS RESPUBLIKOS APLINKOS MINISTRO
Į S A K Y M A S
DĖL LIETUVOS APLINKOS APSAUGOS NORMATYVINIŲ DOKUMENTŲ LAND 53-2003, LAND 54-2003, LAND 55-2003, LAND 56-2003, LAND 57-2003 PATVIRTINIMO
2003 m. gruodžio 24 d. Nr. 708
Vilnius
Vadovaudamasis Lietuvos Respublikos aplinkos monitoringo įstatymo (Žin., 1997, Nr. 112-2824) 6 straipsniu, Lietuvos Respublikos aplinkos ministerijos nuostatų (Žin., 1998, Nr. 84-2353; 2002, Nr. 20-766) 6.8 punktu,
1. Tvirtinu Lietuvos Respublikos aplinkos apsaugos normatyvinius dokumentus:
1.1. LAND 53-2003 „Fitoplanktono tyrimo metodika paviršinio vandens telkiniuose“ (pridedama);
1.2. LAND 54-2003 „Fitoperifitono tyrimo metodika paviršinio vandens telkiniuose“ (pridedama);
1.3. LAND 55-2003 „Zooplanktono tyrimo metodika paviršinio vandens telkiniuose“ (pridedama);
1.4. LAND 56-2003 „Chlorofilo „a“ kiekio nustatymo metodas fitoplanktone“ (pridedama);
1.5. LAND 57-2003 „Makrozoobentoso tyrimo metodika paviršinio vandens telkiniuose“ (pridedama).
2. Nustatau, kad šie aplinkos apsaugos normatyviniai dokumentai privalomi juridiniams ir fiziniams asmenims, nustatyta tvarka atliekantiems aplinkos tyrimus.
APLINKOS MINISTRAS ARŪNAS KUNDROTAS
PATVIRTINTA
Lietuvos Respublikos aplinkos ministro
2003 m. gruodžio 24 d. įsakymu Nr. 708
FITOPLANKTONO TYRIMO METODIKA
PAVIRŠINIO VANDENS TELKINIUOSE
LAND 53-2003
1. Taikymo sritis
Šiame normatyviniame dokumente pateikiama paviršinio vandens telkinių tyrimo metodika pagal fitoplanktoną.
2. Normatyvinės nuorodos
Normatyvinis dokumentas parengtas remiantis šiais dokumentais:
2.1. LST 1426:1996. Vandens savybės. Terminai ir apibrėžimai.
2.2. LST EN 25667-2:2001. Vandens kokybė. Mėginių ėmimas. 2 dalis. Nurodymai, kaip imti mėginius (ISO 5667-2:1991).
2.3. LST EN ISO 5667-3:2001. Vandens kokybė. Mėginių ėmimas. 3 dalis. Nurodymai, kaip konservuoti ir gabenti mėginius (ISO 5667-3:1994).
2.4. Lietuvos HN 23:2001. Kenksmingų cheminių medžiagų koncentracijų ribinės vertės darbo aplinkos ore. Bendrieji reikalavimai.
2.5. LST EN ISO 3696:1996. Analizės vanduo. Apibūdinimas ir bandymo metodai.
3. Terminai ir apibrėžimai
3.1. Paviršinis vanduo – žemės paviršiumi tekantis arba stovintis vanduo.
3.2. Oligosaprobinis vanduo – paviršinis vanduo, kuriame mineralizavimas užbaigtas. Jame gausu ištirpusio deguonies, gali gyventi įvairiausi augalai ir gyvūnai, visų pirma fototrofiniai augalai ir deguoniui reiklūs gyvūnai.
3.3. Mezosaprobinis vanduo – vidutiniškai užterštas vanduo, pasižymintis tam tikromis organizmų rūšimis ir nuosaikia deguonies koncentracija.
3.4. Polisaprobinis vanduo – gausiai užterštas tirpiomis organinėmis medžiagomis ir jų anaerobinio irimo produktais.
3.5. Litoralė – priekrantė, negili vandens juosta (iki 3,0 m gylio), apaugusi aukštesniaisiais augalais; jai būdingas vandens judėjimas, nepastovi vandens temperatūra, geras apšvietimas.
3.6. Biocenozė – sausumos arba vandens baseino plote gyvenančių augalų, gyvūnų ir mikroorganizmų visuma, tarp kurių nuolat vyksta medžiagų ir energijos apytaka ir yra susiformavę palyginti pastovūs tarpusavio santykiai bei ryšiai.
3.7. Biotopas – sausumos ar akvatorijos plotas, kuriam būdingi tam tikri geografiniai, abiotiniai ir biotiniai visiškai natūralūs ar pusiau natūralūs aplinkos požymiai.
3.8. Fitoplanktonas – augalinis planktonas – vandenyje suspenduotų augalinių mikroorganizmų (bakterijų, mikromicetų, žaliadumblių, titnagdumblių, melsvadumblių ir kt.) visuma.
3.9. Dumbliai – didelė grupė vienaląsčių ar daugialąsčių organizmų, kuriuose yra chlorofilo ar kitokio pigmento. Jie gyvena vandenyje ir geba atlikti fotosintezę.
3.10. Bioindikatorius – organizmas ar organizmų bendrijos, kurių gyvybinės funkcijos glaudžiai susijusios su aplinkos sąlygomis ir kurie gali būti tų sąlygų kokybės rodikliu.
3.11. Saprobiškumas – organizmų gebėjimas gyventi organinėmis medžiagomis užterštuose vandenyse.
3.12. Saprobiškumo indeksas (S) – skaitmeninis dydis vandens telkinio biocenozei apibūdinti, vartojamas telkinio biologinei kokybei nurodyti.
3.13. Saprobinis valentingumas – rūšies gebėjimo prisitaikyti prie aplinkos sąlygų laipsnis.
3.14. Mėginio konservavimas – tiriamųjų mėginio savybių išlaikymas per laikotarpį nuo mėginio paėmimo iki analizavimo, pridedant fiksavimo reagentų ir/arba keičiant fizines sąlygas.
3.15. Dekantavimas (nufiltravimas) – paviršinio skysčio nupylimas nuo nusistojusių nuosėdų arba tankesnio sluoksnio leidžiant jį pro akytos medžiagos sluoksnį arba tam tikro tankumo tinklelį.
3.16. Sedimentacija – dumblių ląstelių nusėdimas.
3.17. Biomasė – vienos organizmų rūšies, rūšių grupės ar visos bendrijos individų masė, tenkanti ploto ar tūrio vienetui; dažniausiai reiškiama g/m2, g/m3, kg/ha drėgnos ar sausos medžiagos.
3.18. Taksonas – sistematinė (taksonominė) kategorija, apimanti giminingų organizmų grupę; augalų, gyvūnų arba grybų sistematikos vienetas: rūšis, gentis, šeima, klasė ir t. t.
3.19. Epilimnionas – vanduo, esantis virš terminio sprūdžio.
3.20. Hipolimnionas -vanduo, esantis žemiau terminio sprūdžio.
3.21. Metalimnionas (terminis sprūdis) – temperatūriškai susisluoksniavusio vandens telkinio sluoksnis, kuriame temperatūros gradientas didžiausias.
4. Principas
Fitoplanktonas, būdamas pirmąja grandimi mitybinių santykių grandinėje, greičiausiai reaguoja į aplinkos sąlygų pakitimus (ypač cheminę vandens sudėtį), todėl vienos ar kitos dumblių rūšies išplitimas planktone rodo tam tikrą telkinyje susidariusių sąlygų kompleksą bei vandens kokybės lygį.
Vandens kokybė nustatoma pagal:
a) fitoplanktono rūšinę sudėtį, išskiriant ekologiškai apibrėžtas rūšis pagal jų indikatorines savybes;
b) kiekvienos rūšies pasitaikymo dažnumą;
c) fitoplanktono ląstelių skaičių ir biomasę.
Įvertinant vandens kokybę pagal fitoplanktono tyrimo rezultatus, naudojamas R. Pantle ir H. Buck metodas [5], modifikuotas V. Sladečeko [6]. Pagal šį metodą fitoplanktono tyrimo rezultatai išreiškiami skaičiumi ir leidžia palyginti tarpusavyje įvairių vandens telkinių kokybės būklę.
5. Reagentai ir medžiagos
Leidžiama naudoti tik apibrėžtos analizinės kvalifikacijos reagentus ir distiliuotą vandenį, atitinkantį 3 kokybės laipsnį (2.5).
5.1. Lugol'o tirpalas, skirtas mikroskopavimui;
5.2. formalinas, 40 % stabilizuotas formaldehido tirpalas;
5.3. etanolis, etilo alkoholis, (CH3CH2OH), 96 tūrio %;
5.4. kalio jodidas (KI);
5.5. jodas kristalinis (I2);
5.6. natrio bikarbonatas (NaHCO3);
5.7. kedro aliejus, skirtas mikroskopavimui.
6. Naudojama įranga, prietaisai ir indai
6.1. batometras – Rutnerio, Molčanovo arba kitos konstrukcijos;
6.2. mikroskopas, didinantis iki 1000 kartų;
6.3. okuliarinis mikrometras;
6.4. okuliaro matavimo skalė;
6.5. objektinis mikrometras;
6.6. planktoniniai tinkleliai (akutės dydis 0,064-0,081 mm);
6.7. prietaisas vandens skaidrumui išmatuoti (Secchi diskas);
6.8. skaičiavimo kameros dumblių kiekiui skaičiuoti: Nažotto, Goriajevo, Fuks-Rozentalio arba kt.;
6.9. pipetės;
6.10. guminės žarnelės (3 mm – 5 mm vidinio skersmens);
6.11 guminės kriaušės (50, 100 cm3 talpos);
6.12. stikliniai vamzdeliai, (3 mm – 5 mm vidinio skersmens);
6.13. emaliuotas arba polietileno kibiras;
6.14. polipropileno buteliai, 1 l talpos;
6.15. tamsaus stiklo graduoti buteliai, 100 ml talpos;
6.16. objektiniai stikleliai;
6.17. dengiamieji stikleliai, 0,17 mm storio;
6.18. batisto audinys arba servetėlės;
6.19. plastmasinė dėžė, skirta indams su mėginiais transportuoti;
6.20. lininiai, sintetiniai siūlai, gumelės ar kt.;
6.21. pieštukas.
7. Darbų sauga
Atliekant tyrimus, reikia vadovautis bendraisiais darbų saugos reikalavimais.
8. Mėginys
8.1. Indų paruošimas
Indai, į kuriuos pilamas tiriamasis mėginys, turi būti stikliniai arba iš chemiškai inertiškos medžiagos – polietileno arba polipropileno, vieno litro talpos. Po sedimentacijos mėginiai laikomi graduotuose 100 ml talpos tamsaus stiklo užsukamuose buteliuose. Indai turi būti išplauti nejoninių ir anijoninių ploviklių mišiniu ir išskalauti vandeniu.
8.2. Konservavimo tirpalų paruošimas
8.2.1. Lugol'o tirpalo paruošimas
Į stiklinę su 1000 ml žyma įpilama 600 ml distiliuoto vandens. Nuolat maišant magnetine maišykle ištirpinama 20 g KJ, po to pridedama 10 g kristalinio jodo ir maišoma, kol jodas ištirpsta. Skiedžiama distiliuotu vandeniu iki 1000 ml tūrio, tirpalas gerai išmaišomas ir laikomas tamsaus stiklo butelyje (2.3).
8.2.2. Neutralaus formalino paruošimas
Formalinas neutralizuojamas lašinant sotų natrio bikarbonato tirpalą, nuolat maišant magnetine maišykle iki neutralios reakcijos.
8.3. Mėginių tipai ir jų ėmimas
Mėginiai imami pagal LST EN 25667-2:2001 (2.2).
8 3.1. Mėginio ėmimas upėse
Upėse, kur fitoplanktono vertikalus pasiskirstymas sąlyginai yra tolygus, vanduo žinomo tūrio indu semiamas iš paviršinio sluoksnio, įmerkus uždarytą indą 0,15-0,20 m gylyje į vandenį, jį atidaryti, pripildyti ir uždarytą iškelti. Mėginys imamas iš upės vidurio.
8 3.2. Mėginio ėmimas ežeruose ir vandens saugyklose
Ežeruose ir vandens saugyklose imami dviejų tipų vandens mėginiai:
1) vienkartinis mėginys – iš paviršinio vandens sluoksnio,
2) sudėtinis mėginys – iš kelių mėginių.
8.3.2.1. Vienkartinis mėginys
Vienkartiniai paviršinio vandens sluoksnio mėginiai imami ežero epilimnione, 0,5 m gylyje, batometru arba 1 l talpos buteliu.
8.3.2.2. Sudėtinis mėginys
Sudėtinis mėginys gaunamas imant mėginius toje pačioje vietoje vienodais tūriais iš skirtingų gylių ir juos sumaišant.
Pirmiausia, prieš imant sudėtinius mėginius, baltu Secchi disku iš valties šešėlinės pusės pamatuojamas vandens skaidrumas. Gautas dydis suapvalinamas iki artimiausio pilno arba pusės decimetro. Po to matuojama vandens temperatūra. Vandens temperatūra matuojama kas metrą, einant gilyn (pradedama nuo 0,2 m).
Paprastai imamas tik vienas sudėtinis mėginys, bet jeigu šviesos sritis sluoksniuotuose ežeruose tęsiasi žemiau terminio sprūdžio sluoksnio (metalimniono), imamas sudėtinis mėginys ir iš hipolimniono.
Sudėtinių vandens mėginių ėmimas, atsižvelgiant į vandens gylį, šviesos sritį ir terminio sprūdžio sluoksnį:
1) Mėginių ėmimas iš ežerų be terminio sprūdžio sluoksnio
A: Kai vandens telkinio gylis yra < 1,5 m, 1l tūrio vandens mėginiai imami batometru iš:
1) 0,2 m gylio;
2) 1,0 m gylio, bet ne giliau, kadangi reikia vengti priedugnės sluoksnio. Šių ežerų šviesos sritis būna nedidelė ir riba tarp vandens ir nuosėdų neryški (šviesos sritis – tai sritis nuo vandens paviršiaus iki skaidrumo gylio pagal Secchi diską padauginto iš 2).
Iš šių gylių paimti 1l tūrio vandens mėginiai kibire atsargiai sumaišomi ir pasemiamas 1l tūrio vandens mėginys.
B: Kai vandens telkinio gylis yra > 1,5 m, 1l tūrio vandens mėginiai imami vienodais intervalais, kas 2 gylio m, bet giliausiai – iki dvigubo skaidrumo gylio (skaidrumo gylis pagal Secchi diską padaugintas iš 2) (1 lentelė).
Sudėtinio mėginio ėmimo lentelė:
1 lentelė
Skaidrumo gylis pagal Secchi diską, m
Dvigubo skaidrumo gylis, m
Sudėtinio mėginio ėmimo gyliai,
m
2,0
3,0
4,0
5,0
4,0
6,0
8,0
10,0
0,2; 2,0; 4,0
0,2; 2,0; 4,0; 6,0
0,2; 2,0; 4,0; 6,0; 8,0
0,2; 2,0; 4,0; 6,0; 8,0; 10,0
1l tūrio vandens mėginiai, paimti iš skirtingų gylių, kibire atsargiai sumaišomi ir pasemiamas 1l tūrio mėginys fitoplanktonui.
2) Mėginių ėmimas iš ežerų su terminio sprūdžio sluoksniu
A. Kai vandens telkinio šviesos sritis (skaidrumo gylis x 2) yra virš hipolimniono, 1l tūrio vandens mėginiai imami kas 2 m iki dvigubo skaidrumo gylio, bet giliausiai – iki terminio sprūdžio sluoksnio apačios (epilimnionas + metalimnionas).
1 pav. Terminiai sluoksniai: 1 – epilimnionas; 2 – metalimnionas; 3 – hipolimnionas.
Šie mėginiai, paimti iš skirtingų gylių, kibire sumaišomi ir paimamas 1l tūrio sudėtinis mėginys fitoplanktonui.
Pavyzdys:
Jeigu vandens telkinio skaidrumas yra 4,2 m, o terminio sprūdžio sluoksnio storis (metalimnionas) yra nuo 4,0 m iki 8,0 m, tai 1l tūrio vandens mėginiai turi būti imami iš šių gylių:
0,2 m; 2,0 m; 4,0 m; 8,0 m.
B. Kai vandens telkinio šviesos sritis tęsiasi hipolimnione, tada imami du sudėtiniai vandens mėginiai.
Pirmą sudėtinį mėginį sudarys vienodais intervalais, iki metalimniono viršaus kas 2 gylio m paimti 1l tūrio vandens mėginiai.
Antrą sudėtinį mėginį sudarys vienodais intervalais, kas 2 m gylio paimti 1l tūrio vandens mėginiai, paimti iš tos hipolimniono dalies, kurią pasiekia šviesos sritis.
Pavyzdys:
Jeigu ežero šviesos sritis yra 12,6 m (pagal Secchi diską 6,3 x 2), o terminio sprūdžio sluoksnis (metalimnionas) siekia nuo 4,0 iki 8,0 m, imami 2 sudėtiniai vandens mėginiai:
Pirmąjį sudėtinį mėginį sudarys mėginiai paimti iš tokių gylių:
0,2 m; 2,0 m; 4,0 m; 6,0 m.
Antrąjį sudėtinį mėginį sudarys mėginiai paimti hipolimnione iš šių gylių:
8,0 m; 10,0 m; 12,0 m.
Pasemti vieno litro tūrio vandens mėginiai iš įvairių horizontų vertikalėje, supilami į emaliuotą arba polietileno kibirą. Atsargiai sumaišius, paimamas sudėtinis 1 litro vandens mėginys.
8.4. Mėginio konservavimas ir laikymas
Pasemtas mėginys iš karto konservuojamas Lugol'o tirpalu, imant jo 1 % mėginio tūrio arba 40 % formaldehidu, imant jo 2 % mėginio tūrio.
Buteliai su užkonservuotais mėginiais sandariai uždaromi.
Prie butelių pritvirtinamos etiketės, užrašomas mėginio numeris, telkinio pavadinimas, vieta, vandens temperatūra, data ir kiti duomenys ar pastebėti gamtos reiškiniai.
Mėginiai saugomi tamsioje vietoje ne mažiau kaip 10 parų, kad visiškai įvyktų fitoplanktono sedimentacija.
9. Procedūra
9.1. Mėginio dekantavimas (nufiltravimas)
Fitoplanktonas koncentruojamas sedimentacijos ir filtracijos metodais. Praėjus nustatytam laikui (ne mažiau kaip 10 parų), kol vyko dumblių sedimentacija, butelis su mėginiu atsargiai, nesujudinant turinio perkeliamas į parinktą aukštį (tinkamame aukštyje įrengtą lentyną slėgių skirtumo sudarymui) ir atliekama fitoplanktono filtracija. Į mėginio vidurinį sluoksnį atsargiai įleidžiama guminė žarnelė (Æ 5 mm) su stikliniu vamzdeliu, kurio galas sandariai užtaisytas planktoniniu tinkleliu (akutės dydis 0,064-0,081 mm) ir atsargiai nusiurbiamas vanduo (iki 100 cm3). Siurbiant reikia nesujudinti indo paviršiuje ir dugne susikaupusių dumblių.
Likęs su fitoplanktonu vanduo suplakamas ir perpilamas į švarų graduotą 100 ml talpos tamsaus stiklo butelį. Po vienos – dviejų parų vanduo nufiltruojamas, paliekant jo 10 cm3.
9.2. Mėginio paruošimas tyrimui
Nufiltruotas fitoplanktono mėginys tiriamas mikroskopu. Ant objektinio stiklelio užlašinamas mėginio lašas, kuris uždengiamas dengiamuoju stikleliu. Darbui naudojami švariai nuplauti objektiniai ir dengiamieji stikleliai, kurie yra laikomi 96 tūrio % etanolyje, stikliniuose induose, uždarytuose pritrintais kamščiais. Objektinis stiklelis yra švarus, jei ant jo vandens lašelis nesilaiko rutuliuku, o plonu sluoksniu pasklinda jo paviršiuje. Dengiamasis stiklelis uždengiamas ypač atidžiai, stebint, kad vandens laše nesusidarytų oro burbuliukų.
9.3. Tyrimo seka
9.3.1. Rūšinės sudėties nustatymas
Fitoplanktono rūšinės sudėties nustatymui mėginys peržiūrimas mikroskopu, didinančiu iki 1000 kartų. Dumblių rūšys identifikuojamos, naudojantis vadovais apibūdintojais [3-4, 7, 9, 12-14]. Gali būti naudojami ir kiti vadovai apibūdintojai.
9.3.2. Fitoplanktono skaitlingumo nustatymas
Fitoplanktono skaitlingumas išreiškiamas ląstelių, kolonijų, atitinkamo ilgio siūlų fragmentų skaičiumi tam tikrame vandens tūryje. Fitoplanktonui suskaičiuoti naudojamos specialios žinomo tūrio skaičiavimo kameros: Nažotto (0,01 cm3), Goriajevo (0,001 cm3), Fuks-Rozentalio (0,0032 cm3). Atlikus skaičiavimus, ląstelių skaičius apskaičiuojamas 1 dm3 (vienam litrui).
Jeigu dumblių gausumui nustatyti naudojama Goriajevo kamera, prieš pradedant darbą su šia kamera, ji ir dengiamasis stiklelis gerai išplaunami etanoliu. Kameros dengiamasis stiklelis pritrinamas taip, kad būtų matyti Niutono žiedai, tik tada kamera pripildoma tiriamosios medžiagos, prieš tai ją kruopščiai suplakus. Nusėdus dumbliams į kameros dugną, pradedama skaičiuoti. Kamera peržiūrima mažuoju ir didžiuoju, taip pat sausuoju ir imersiniu objektyvu, paeiliui peržiūrimi visi kameros tinklelio kvadratai. Randama ląstelė pažymima tašku pirminių duomenų lentelėje, grafoje, atitinkančioje populiaciją, naudojant klasikinį skaičiavimo metodą, komponuojant taškus dešimtimis [18].
Individų (ląstelių) kiekis 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10
Bendras dumblių ląstelių skaičius (N) mėginyje (cm3) nustatomas pagal formulę:
n ´ v1
N= -----------,
v2 ´ w
kur:
n – ląstelių skaičius kameroje;
v1 – koncentruoto mėginio tūris;
w – pradinis paimto mėginio tūris;
v2 – skaičiavimo kameros tūris.
Pavyzdys:
Dumblių skaičius 1 dm3 (1 litre) tiriamo vandens apskaičiuojamas taip:
Kameroje, kurios tūris – 0,001 cm3 (v2) (tokio tūrio yra Goriajevo kamera) buvo suskaičiuota 400 ląstelių. Kai pradinio mėginio tūris – 500 cm3 (w), o koncentruoto – 5 cm3 (v1), įstačius skaitines reikšmes, gaunama:
n ´ v1 400 ląst. ´ 5c m3
N= --------- = ------------------------ = 400 ląst. ´ 10 = 4000 ląst.cm3 arba
v2 ´ w 0,001 cm3 ´500 cm3 4 milijonai ląst.dm3 (l litre).
9.3.3. Fitoplanktono biomasės nustatymas
Dumblių biomasė apskaičiuojama tūrių metodu [10, 11, 15]. Kiekvienos rastos dumblio ląstelės dydis išmatuojamas okuliariniu mikrometru. Išmatavus ląstelių parametrus, skaičiuojamas ląstelės tūris. Dumblio ląstelės tūris pakankamai tiksliai nustatomas, prilyginant jį artimam geometriniam kūnui (rutulys, kubas, cilindras, elipsė) arba tų kūnų kombinacijoms. Turint ląstelių parametrus, jų tūris apskaičiuojamas pagal šių figūrų geometrines tūrių formules. Norint apskaičiuoti atitinkamos rūšies vidutinį ląstelės tūrį, pakanka išmatuoti 30 individų [2]. Rūšies biomasė (b), išreikšta mg/1dm3 (arba mg/l) apskaičiuojama pagal formulę:
b = n x vt x 1,
kur:
n – rūšies individų skaičius;
vt – vidutinis ląstelės tūris, μm3;
1 – dumblių tankis.
Kadangi gėlavandenių dumblių tankis prilyginamas 1,0, tai ląstelės ar kolonijos tūrį padauginus iš priimto dumblių tankio, organizmo tūris perskaičiuojamas į jo biomasę miligramais [1,2]. Kiekvienos rūšies biomasė apskaičiuojama atskirai, po to sumuojama, gaunant bendrą biomasės kiekį mėginyje, išreikštą mg/dm3 arba m/gl.
9.3.4. Mėginio saprobiškumo indekso nustatymas
Vienas iš metodų, naudojamas vandens kokybei nustatyti pagal fitoplanktoną yra R. Pantle ir H. Buck indikatorinių organizmų metodas, modifikuotas V. Sladečeko [5.6].
Šio metodo dėka tyrimų rezultatai išreiškiami saprobiškumo indeksu (S).
Saprobiškumo indekso (S) nustatymui reikia žinoti kiekvienos mėginyje rastos rūšies indikatorinę reikšmę ir jos sutinkamumo dažnumą tiriamajame mėginyje. Indikatorinės fitoplanktono individų reikšmės (s) nustatomos naudojantis saprobinių organizmų sąrašais [16, 17], o rūšies sutinkamumo dažnumas (h) apskaičiuojamas, naudojantis šešių pakopų sutinkamumo dažnumo skale (2 lentelė).
Indikatorinių rūšių sutinkamumo dažnumo skalė
2 lentelė
Rūšies sutinkamumo
dažnumas
Santykinis vienos rūšies individų skaičius nuo bendro individų skaičiaus, išreikštas procentais (%)
Rūšies sutinkamumo
dažnumas, h
Labai retai
£1
1
Retai
2-3
2
Neretai
4-10
3
Dažnai
11-20
5
Labai dažnai
21-40
7
Masiškai
41-100
9
Saprobiškumo indeksas (S) skaičiuojamas pagal formulę:
å (s ´ h)
S = ---------------------,
å h
kur:
s – indikatorinio organizmo saprobinis valentingumas;
h – indikatorinio organizmo sutinkamumo dažnumas.
Saprobiškumo indeksas (S) apskaičiuojamas 0,01 dalies tikslumu. Pagal mėginio saprobiškumo indeksą nustatoma vandens telkinio ar tirtos vietos saprobiškumo zona (3 lentelė).
Saprobiškumo zonų lentelė
3 lentelė
Saprobiškumo zona
Saprobiškumo indekso skaitinės reikšmės
Ksenosaprobinė (x)
nuo 0 iki 0,50
Oligosaprobinė (o)
nuo 0,51 iki 1,50
Beta-mezosaprobinė (b)
nuo 1,51 iki 2,50
Alfa-mezosaprobinė (a)
nuo 2,51 iki 3,50
Polisaprobinė (p)
nuo 3,51 iki 4,00
Saprobiškumo indekso skaičiavimo pavyzdys pateiktas 4 lentelėje:
4 lentelė
Rūšies pavadinimas
Saprobiškumo zona
Rūšies saprobinis valentingumas, s
Rūšies sutinkamumo dažnumas, h
s ´ h
Navicula radiosa
o-b
1,6
2
3,2
Nitzchia liniaris
o-b
1,5
2
3,0
Pediastrum duplex
b
1,7
3
5,1
Stephanodiscus hanthschii
a
2,7
5
13,5
Trachelomonas volvocina
b
2,0
5
10,0
Suma (å)
å 17
å 34,8
å (s ´ h) 34,8
S = _____________ = ______ = 2,04;
å h 17
S = 2,04.
Pagal gautą mėginio saprobiškumo indekso skaitinę reikšmę (S – 2,04) nustatome tirtos vietos saprobiškumo zoną (3 lentelė) [15].
Tirtas vandens mėginys pagal fitoplanktono organizmus priklauso Beta-mezosaprobinei (β) zonai.
10. Duomenų pateikimas
Fitoplanktono tyrimų duomenys pateikiami lentelėse. Jose turi būti pateikta ši informacija:
mėginio numeris;
telkinio pavadinimas;
mėginio ėmimo vieta;
data, val.;
vandens temperatūra, oC;
mėginyje nustatytų rūšių sąrašas;
nustatytas kiekvienos rūšies individų skaičius (skaitlingumas);
kiekvienos rūšies saprobinis valentingumas (s);
rūšies sutinkamumo dažnumas (h);
kiekvienos rūšies individo biomasė;
bendras rūšių skaičius mėginyje;
bendras dumblių skaitlingumas mėginyje, išreikštas
tūkst. ląstelių m3 (arba l);
bendra individų biomasė, išreikšta mg/m3 (arba μg/l);
bendras mėginio saprobiškumo indeksas (S).
BIBLIOGRAFIJA
1. Jankavičiūtė G. Lietuvos vandenų vyraujantys dumbliai. – Mokslo ir enciklopedijų leidykla., Vilnius, 1996.
2. Kavaliauskienė J. Lietuvos ežerų dumbliai. – Geografijos institutas, 1996.
3. Flora słodkowodna Polski. – Polska Akademia nauk. Panstvowe wydawnictwo naukowe, Warszawa., 1964-1969, T. 1, 2, 3, 4, 5.
4. Liebmann. Handbuch der Frischwasser – und Abwasser – Biologie. – Jena, 1962.
5. Pantle R., Buck H. Die biologische Uberwachung der Gewasser und die Darstellung der Ergebnisse. – Gas und Wasserfach, 1955, H. 96 (18).
6. Sladecek V. System of Water Quality from the Biological Point of View. – Arch Hydrobiol., 1973, Bein.7, 1 – 218.
7. Toini Tikkanen. Torbjorn Willen. Vaxtplanktonflora. – Naturvardsverket, 1992.
8. Wegl R. Index fur die Limnosaprobitat. Wasser und Abwasser, 1983, Bd 26, 1 – 175.
9. Васильева И. И. Эвгленовые и желтозеленые водоросли Якутии. – Изд. «Наука», 1987.
10. Киселев И. А. Планктон морей и континентальных водоемов. – Изд. «Наука», Л., 1969, m. 1.
11. Кумсаре А. Я. Расчет биомассы фитопланктона по суммарному объему
клеток. – Гидробиология и ихтиология внутренних водоемов Прибалтики. – Рига., 1963, 67 – 73.
12. Определитель низших растений. – изд. «Советская наука», 1977, T. 1, 2.
13. Определитель преснoводных водорослей СССР – Изд. «Советская наука», 1951.
14. Пресноводные диатомовые и синезеленые водоросли водоемов Якутии. – Изд. «Наука», М., 1975.
15. Руководство по методам гидробиологического анализа поверхностных вод и донных отложений. – Гидрометеоиздат, 1983.
16. Унифицированные методы исследования качества вод: часть III. Mетоды биологического анализа вод. М., 1977.
17. Унифицированные методы исследования качества вод: часть III. Mетоды биологического анализа вод. М., 1983.
______________
PATVIRTINTA
Lietuvos Respublikos aplinkos ministro
2003 m. gruodžio 24 d. įsakymu Nr. 708
FITOPERIFITONO TYRIMO METODIKA
PAVIRŠINIO VANDENS TELKINIUOSE
LAND 54-2003
1. Taikymo sritis
Šiame normatyviniame dokumente pateikiama paviršinio vandens telkinių fitoperifitono tyrimo metodika.
2. Normatyvinės nuorodos
Normatyvinis dokumentas parengtas remiantis šiais dokumentais:
2.1. LST 1426:1996. Vandens savybės. Terminai ir apibrėžimai.
2.2. LST EN 25667-2:2001. Vandens kokybė. Mėginių ėmimas. 2 dalis. Nurodymai, kaip imti mėginius (ISO 5667-2:1991).
2.3. LST EN ISO 5667-3:2001. Vandens kokybė. Mėginių ėmimas. 3 dalis. Nurodymai, kaip konservuoti ir gabenti mėginius (ISO 5667-3:1994).
2.4. LST EN ISO 3696:1996. Analizės vanduo. Apibūdinimas ir bandymo metodai.
2.5. Lietuvos HN 23:2001. Kenksmingų cheminių medžiagų koncentracijų ribinės vertės darbo aplinkos ore. Bendrieji reikalavimai.
3. Terminai ir apibrėžimai
3.1. Paviršinis vanduo – žemės paviršiumi tekantis arba stovintis vanduo.
3.2. Perifitonas (apaugimai) – tai augalai ir gyvūnai, kurie yra prisitvirtinę prie kietų vandens telkinio substratų ir aukštesniųjų augalų bei jų dalių, esančių po vandeniu, ir aptinkamas tik litoralinėje zonoje.
3.3. Fitoperifitonas – augalinė perifitono dalis, kurią sudaro bakterijų, žaliadumblių, titnagdumblių, melsvadumblių ir kitų visuma.
3.4. Litoralė – priekrantė, negili vandens juosta (iki 3,0 m gylio), apaugusi aukštesniaisiais augalais; jai būdingas vandens judėjimas, nepastovi vandens temperatūra, geras apšvietimas.
3.5. Saprobiškumas – organizmų gebėjimas gyventi organinėmis medžiagomis užterštuose vandenyse.
3.6. Saprobiškumo indeksas (S) – skaitmeninis dydis vandens telkinio biocenozei apibūdinti vartojamas telkinio biologinei kokybei nurodyti.
3.7. Saprobinis valentingumas – rūšies gebėjimo prisitaikyti prie aplinkos sąlygų laipsnis.
3.8. Mėginio fiksavimas – tiriamųjų mėginio savybių išsaugojimas per laikotarpį nuo mėginio paėmimo iki analizavimo, pridedant fiksavimo reagentų.
3.9. Taksonas – sistematinė (taksonominė) kategorija, apimanti giminingų organizmų grupę; augalų, gyvūnų arba grybų sistematikos vienetas: rūšis, gentis, šeima, klasė ir t. t.
4. Principas
Vandens telkinio kokybės įvertinime fitoperifitonas yra vienas iš svarbiausių ingredientų. Fitoperifitoną sudarantys organizmai atspindi būtent tos tyrimo vietos sąlygas, nes nėra atnešti srovės atsitiktinai iš kitų vietų, kaip tai atsitinka su planktonu.
Vandens kokybė nustatoma pagal:
a) fitoperifitono rūšinę sudėtį;
b) kiekvienos rūšies pasitaikymo dažnumą.
Įvertinant vandens kokybę pagal fitoperifitono tyrimo rezultatus, naudojamasi V. Sladečeko modifikuota R. Pantle ir H. Buck metodika [3.4], V. Sladečeko saprobinio valentingumo sąrašais [11.12].
Laikantis šių metodinių principų fitoperifitono tyrimų rezultatai išreiškiami skaitmenine forma ir leidžia palyginti tarpusavyje vandens telkinių kokybės būklę, kai kiekvieno jų saprobiškumo indeksai (S) apskaičiuoti pagal formulę.
5. Reagentai ir medžiagos
Leidžiama naudoti tik apibrėžtos analizinės kvalifikacijos reagentus ir distiliuotą vandenį, atitinkantį 3 kokybės laipsnį (2.4).
5.1. Lugol'o tirpalas, skirtas mikroskopavimui;
5.2. kalio jodidas (KI);
5.3. jodas kristalinis (I2);
5.4. etanolis, etilo alkoholis, (CH3CH2OH), 96 tūrio %;
5.5. kedro aliejus, skirtas mikroskopavimui.
6. Naudojama įranga, prietaisai ir indai
6.1. Mikroskopas, didinantis iki 1000 kartų;
6.2. binokuliarinis stereoskopinis mikroskopas, didinantis iki 100 kartų;
6.3. objektiniai stikleliai (2 mm storio);
6.4. dengiamieji stikleliai (0,17 mm storio);
6.5. preparavimo adatėlės;
6.6. pincetai;
6.7. skalpeliai, gremžtukai;
6.8. įvairūs šepetėliai, pvz., dantų šepetukas;
6.9. pipetės;
6.10. Petri lėkštelės;
6.11. piltuvėliai;
6.12. plastikinė (plastmasinė) vonelė;
6.13. tamsaus stiklo buteliukai, 250 ml talpos;
6.14. batisto audinys, servetėlės;
6.15. plastmasinė dėžė, skirta indams su mėginiais transportuoti;
6.16. mėginių registracijos žurnalas;
6.17. spinta arba patalpa mėginių laikymui tamsoje;
6.18. pieštukas.
7. Darbų sauga
Atliekant tyrimus reikia vadovautis bendraisiais darbų saugos reikalavimais.
8. Mėginys
8.1. Indų paruošimas
Indai, į kuriuos talpinamas tiriamasis mėginys, turi būti tamsaus stiklo, 250 ml talpos buteliukai. Indai turi būti gerai išplauti nejoninių ir anijoninių ploviklių mišiniu ir išskalauti vandeniu.
8.2. Fiksavimo tirpalų paruošimas
8.2.1. Lugol'o tirpalo paruošimas
Į stiklinę su 1000 ml žyma įpilama 600 ml distiliuoto vandens. Nuolat maišant magnetine maišykle ištirpinama 20 g KJ, po to pridedama 10 g kristalinio jodo ir maišoma, kol jodas ištirpsta. Skiedžiama distiliuotu vandeniu iki 1000 ml tūrio, tirpalas gerai išmaišomas.
8.3. Mėginių ėmimas
Mėginiai imami pagal LST EN 25667-2:2001 (2.2).
8.1. Mėginio ėmimo vieta
Fitoperifitono mėginį imant nuo po vandeniu esančio kieto substrato, upės tėkmėje, gaunami patikimiausi rezultatai. Jokiu būdu negalima imti ten, kur stovintis vanduo.
Fitoperifitono mėginį kiekvieną kartą reikia imti toje pačioje vietoje ir nuo tų pačių substratų, kad vėliau, lyginant gautus duomenis, jie būtų patikimesni. Tinkamiausi substratai yra akmenys ir betoniniai įrenginiai.
8.2. Mėginio ėmimo seka
8.2.1. Fiksuotas mėginys
8.2.1. Įbridus į vandenį, surandame fitoperifitono mėginiui tinkamą kietą paviršių, pvz., akmenį (tinka akmenys su žalsvu arba pilku apnašu), nuo kurio aštriu peiliu, skalpeliu ar gremžtuku atsargiai nugremžiamas kietas paviršius;
8.2.2. Jei nėra kieto paviršiaus, surandame po vandeniu panirusias aukštesniųjų augalų dalis ir jas minkštu šepetėliu atsargiai nuplauname į indą su vandeniu (pvz., į plastmasinę vonelę ar stiklainį). Jeigu randami smulkūs augalai, jų dalys talpinamos į stiklainį su vandeniu ir kruopščiai kratoma. Po to jie iš stiklainio išimami ir išmetami, o nuoplovos saugomos tyrimui.
8.2.3. Nuogramdos ar nuoplovos sudedamos į tamsaus stiklo butelį ir užpilamos vandens telkinio vandeniu.
Taip surinkti mėginiai vietoje fiksuojami Lugol'o tirpalu, imant jo 1 mėginio tūrio.
Prie butelių pritvirtinamos etiketės, užrašomas mėginio numeris, telkinio pavadinimas, vieta ir data.
Mėginiai saugomi tamsioje vietoje.
8.2.2. Nefiksuotas mėginys
Fitoperifitono mėginiui gali būti surenkami apaugę akmenukai ar aukštesniųjų augalų pasinėrusios dalys į buteliuką, užpilami telkinio vandeniu, bet nefiksuojami. Toks mėginys turi būti per 6 val. atvežtas į laboratoriją ir tiriamas tuoj pat, nugremžiant kietą tiriamo substrato paviršių ir pasigaminant preparatą.
9. Procedūra
9.1. Mėginio paruošimas tyrimui
Ant objektinio stiklelio užlašinamas tiriamojo mėginio lašas, kuris uždengiamas dengiamuoju stikleliu. Darbui naudojami švariai nuplauti objektiniai ir dengiamieji stikleliai, kurie laikomi 96 tūrio % etanolyje. Objektinis stiklelis yra švarus, jei ant jo vandens lašelis nesilaiko rutuliuku, o plonu sluoksniu pasklinda jo paviršiuje. Dengiamasis stiklelis uždengiamas ypač atidžiai, stebint, kad vandens laše nesusidarytų oro burbuliukų.
9.2. Tyrimo seka
9.2.1. Rūšinės sudėties nustatymas
Fitoperifitono rūšinės sudėties nustatymui mėginys peržiūrimas mikroskopu, didinančiu iki 1000 kartų. Mėginys peržiūrimas tol, kol neberandama naujų rūšių. Paprastai užtenka peržiūrėti 3-4 preparatus. Dumblių rūšys identifikuojamos, naudojantis vadovais apibūdintojais [1, 2, 5, 6, 7-9]. Gali būti naudojami ir kiti vadovai apibūdintojai.
9.2.2. Mėginio saprobiškumo indekso nustatymas
Vienas iš metodų, naudojamas vandens kokybei nustatyti pagal fitoperifitoną yra R. Pantle ir H. Buck indikatorinių organizmų metodas, modifikuotas V. Sladečeko [3.4].
Šio metodo dėka tyrimų rezultatai išreiškiami saprobiškumo indeksu.
Saprobiškumo indekso (S) nustatymui reikia žinoti kiekvienos mėginyje rastos rūšies indikatorinę reikšmę ir jos sutinkamumo dažnumą tiriamajame mėginyje. Indikatorinės fitoperifitono individų reikšmės (s) nustatomos naudojantis saprobinių organizmų sąrašais [11.12] o rūšies sutinkamumo dažnumas (h) apskaičiuojamas, naudojantis šešių pakopų sutinkamumo dažnumo skale (1 lentelė).
Indikatorinių rūšių sutinkamumo dažnumo skalė
1 lentelė
Rūšies sutinkamumo
dažnumas, h
1 – Keletas (vienetiniai egzemplioriai mėginyje)
2 – Labai retai (vienetai kiekviename preparate)
3 – Retai (keliuose matymo laukuose)
5 – Neretai (ne visuose matymo laukuose)
7 – Dažnai (kiekviename matymo lauke)
9 – Labai dažnai (daug kiekviename matymo lauke)
Saprobiškumo indeksas (S) skaičiuojamas pagal formulę:
å (s ´ h)
S = ---------------------,
å h
kur:
s – indikatorinio organizmo saprobinis valentingumas;
h – indikatorinio organizmo sutinkamumo dažnumas.
Saprobiškumo indeksas (S) apskaičiuojamas 0,01 dalies tikslumu. Pagal mėginio saprobiškumo indeksą nustatoma vandens telkinio ar tirtos vietos saprobiškumo zona (2 lentelė).
Saprobiškumo zonų lentelė
2 lentelė
Saprobiškumo zona
Saprobiškumo indekso skaitinės reikšmės
Ksenosaprobinė (x)
nuo 0 iki 0,50
Oligosaprobinė (o)
nuo 0,51 iki 1,50
Beta-mezosaprobinė (b)
nuo 1,51 iki 2,50
Alfa-mezosaprobinė (a)
nuo 2,51 iki 3,50
Polisaprobinė (p)
nuo 3,51 iki 4,00
Saprobiškumo indekso skaičiavimo pavyzdys pateiktas 3 lentelėje:
3 lentelė
Rūšies pavadinimas
Saprobiškumo zona
Rūšies saprobinis valentingumas, s
Rūšies sutinkamumo dažnumas, h
s ´ h
Navicula radiosa
o-b
1,6
2
3,2
Nitzchia liniaris
o-b
1,5
2
3,0
Pediastrum duplex
b
1,7
3
5,1
Stephanodiscus hanthschii
a
2,7
5
13,5
Trachelomonas volvocina
b
2,0
5
10,0
Suma (å)
å 17
å 34,8
å (s ´ h) 34,8
S = _____________ = ______ = 2,04;
å h 17
S = 2,04.
Pagal gautą mėginio saprobiškumo indekso skaitinę reikšmę (S – 2,04) nustatome tirtos vietos saprobiškumo zoną (3 lentelė) [10].
Tirta vandens telkinio vieta pagal fitoperifitono organizmus priklauso Beta-mezosaprobinei (β) zonai.
10. Duomenų pateikimas
Fitoperifitono tyrimų duomenys pateikiami lentelėse. Jose turi būti pateikta ši informacija:
telkinio pavadinimas;
mėginio ėmimo vieta;
data, val.;
vandens temperatūra, oC;
mėginyje nustatytų rūšių sąrašas;
kiekvienos rūšies saprobinis valentingumas (s);
rūšies sutinkamumo dažnumas (h);
bendras rūšių skaičius mėginyje;
mėginio saprobiškumo indeksas (S).
Bibliografija
1. Flora słodkowodna Polski. – Polska Akademia Nauk. Panstvowe wydawnictwo naukowe. – Warszawa, 1964-1969. T. 1-2-3-4-5.
2. Liebmann. Handbuch der Frischwasser und Abwasser. – Jena, 1962.
3. Pantle R., Buck H. Die biologische Uberwachung der Gewasser und die
Darstellung der Ergebnisse. – Gas und Wasserfach, 1955, H, 96 (18).
4. Sladecek V. System of Water Quality from the Biological Point of View. – Arch Hydrobiol., 1973, Bein. 7, 1-218.
5. Toini Tikkanen, Torbjorn Willen. Vaxtplanktonflora. Naturvardsverket, 1992.
6. Васильева И. И. Эвгленовые и желтозеленые водоросли Якутии. – Изд. «Наука», 1987.
7. Определитель низших растений в пяти томах. – Изд. «Советская наука», 1977.
8. Опрелелитель пресневодных водорослей СССР. – Изд. «Советская наука», 1951.
9. Пресноводные диатомовые и синезеленые водоросли водоемов Якутии. – Изд. «Наука», М., 1975.
10. Руководство по методам гидробиологического анализа повертностных вод и донных отложений. – Гидрометеоиздат, 1983.
11. Унифицированные методы исследования качества вод: Часть III. Mетоды биологического анализа вод, М., 1977.
12. Унифицированные методы исследования качества вод: Часть III. Mетоды биологического анализа вод, М., 1983.
______________
PATVIRTINTA
Lietuvos Respublikos aplinkos
ministro 2003 m. gruodžio 24 d.
įsakymu Nr. 708
ZOOPLANKTONO TYRIMO METODIKA
PAVIRŠINIO VANDENS TELKINIUOSE
LAND 55-2003
1. Taikymo sritis
Šiame normatyviniame dokumente pateikiama paviršinio vandens telkinių tyrimo metodika pagal zooplanktoną.
2. Normatyvinės nuorodos
2.1. LST 1426:1996. Vandens savybės. Terminai ir apibrėžimai.
2.2. LST EN 25667-2:2001. Vandens kokybė. Mėginių ėmimas. 2 dalis. Nurodymai, kaip imti mėginius (ISO 5667-2:1991).
2.3. LST EN ISO 5667-3:2001. Vandens kokybė. Mėginių ėmimas. 3 dalis. Nurodymai, kaip konservuoti ir gabenti mėginius (ISO 5667-3:1994).
2.4. Lietuvos HN 23:2001. Kenksmingų cheminių medžiagų koncentracijų ribinės vertės darbo aplinkos ore. Bendrieji reikalavimai.
2.5. LST EN ISO 3696:1996. Analizės vanduo. Apibūdinimas ir bandymo metodai.
3. Terminai ir apibrėžimai
3.1. Paviršinis vanduo – žemės paviršiumi tekantis arba stovintis vanduo.
3.2. Zooplanktonas – vandenyje plūduriuojančių arba skendinčių organizmų (daugiausia smulkių gyvūnų, tačiau gali būti ir stambesnių, menkai gebančių judėti) visuma.
3.3. Biocenozė – sausumos arba vandens baseino plote gyvenančių augalų, gyvūnų ir mikroorganizmų visuma, tarp kurių nuolat vyksta medžiagų ir energijos apytaka ir yra susiformavę palyginti pastovūs tarpusavio santykiai bei ryšiai.
3.4. Distrofinis vanduo – mažai biogeninių ir daug humusinių medžiagų turintis vanduo.
3.5. Eutrofinis vanduo – vanduo, kuriame palankios gyvūnams gyventi sąlygos, gausu biogeninių elementų.
3.6. Saprobiškumas – organizmų gebėjimas gyventi organinėmis medžiagomis užterštuose vandenyse.
3.7. Saprobiškumo indeksas (S) – skaitmeninis dydis vandens telkinio biocenozei apibūdinti, vartojamas telkinio biologinei kokybei nurodyti.
3.8. Saprobinis valentingumas – rūšies gebėjimo prisitaikyti prie aplinkos sąlygų laipsnis.
3.9. Mėginio konservavimas – tiriamųjų mėginio savybių išlaikymas per laikotarpį nuo mėginio paėmimo iki analizavimo, pridedant reagentų ir/arba keičiant fizines sąlygas.
3.10. Sedimentacija – organizmų nusodinimas.
3.11. Biomasė – vienos organizmų rūšies, rūšių grupės ar visos bendrijos individų masė, tenkanti ploto ar tūrio vienetui; dažniausiai reiškiama g/m2, g/m3, kg/ha drėgnos ar sausos medžiagos.
3.12. Taksonas – sistematinė (taksonominė) kategorija, apimanti giminingų organizmų grupę; augalų, gyvūnų arba grybų sistematikos vienetas: rūšis, gentis, šeima, klasė ir t. t.
4. Principas
Rūšinė sudėtis ir kiekybinis zooplanktono organizmų išsivystymo laipsnis yra jautrus vandens kokybės indikatorius. Zooplanktono bendrijos pasižymi rūšinės sudėties pastovumu. Aplinkos sąlygų pasikeitimas daro įtaką rūšinei sudėčiai, kiekybiniam išsivystymo lygiui, atskirų taksonominių grupių santykiui ir zooplankterių populiacijų struktūrai. Todėl zooplanktonas gali patikimai atspindėti esamą vandens telkinio būklę.
Vandens kokybė nustatoma pagal:
a) zooplanktono rūšinę sudėtį;
b) kiekvienos rūšies pasitaikymo dažnumą;
c) individų gausumą ir biomasę.
Įvertinant vandens kokybę pagal zooplanktono tyrimo rezultatus, naudojamas R. Pantle ir H. Buck metodas, modifikuotas V. Sladečeko [2.3]. Pagal šį metodą zooplanktono tyrimo rezultatai išreiškiami skaičiumi ir leidžia palyginti tarpusavyje įvairių vandens telkinių kokybės būklę.
5. Reagentai ir medžiagos
Leidžiama naudoti tik apibrėžtos analizinės kvalifikacijos reagentus ir distiliuotą vandenį, atitinkantį 3 kokybės laipsnį (2.5).
5.1. Lugol'o tirpalas, skirtas mikroskopavimui;
5.2. formalinas, 40 % stabilizuotas formaldehido tirpalas;
5.3. kalio jodidas (KI);
5.4. jodas kristalinis (I2);
5.5. natrio bikarbonatas (NaHCO3);
5.6. kedro aliejus, skirtas mikroskopavimui.
6. Naudojama įranga, prietaisai ir indai
6.1. Batometras: Rutnerio, Molčanovo arba kitos konstrukcijos;
6.2. mikroskopas, didinantis iki 1000 kartų;
6.3. binokuliarinis, stereoskopinis mikroskopas, didinantis iki 100 kartų;
6.4. okuliarinis mikrometras;
6.5. okuliaro matavimo skalė;
6.6. objektinis mikrometras;
6.7. planktoninis Apšteino tinklelis (akutės dydis 0,064-0,081 mm);
6.8. Bogorovo kamera;
6.9. 50 ml pipetės;
6.10. guminės kriaušės (50, 100 cm3 talpos);
6.11. graduoti stikliniai vamzdeliai, ne mažiau kaip 3 mm vidinio skersmens;
6.12. objektiniai stikleliai (2 mm storio);
6.13. dengiamieji stikleliai (0,17 mm storio);
6.14. preparavimo adatėlės;
6.15. pincetai;
6.16. 10 l talpos emaliuotas arba plastmasinis kibiras;
6.17. tamsaus stiklo graduoti buteliukai, 100 ml talpos;
6.18. cheminės stiklinaitės, 50-100 ml talpos;
6.19. plastmasinė dėžė, skirta indams su mėginiais transportuoti;
6.20. batisto audinys, servetėlės;
6.21. mėginių registracijos žurnalas;
6.22. standus popierius etiketėms;
6.23. lininiai, sintetiniai siūlai, gumelės arba lipni juosta etiketėms pritvirtinti;
6.24. pieštukas.
7. Darbų sauga
Atliekant tyrimus reikia vadovautis bendraisiais darbų saugos reikalavimais.
8. Mėginys
8.1. Indų paruošimas
Indai, į kuriuos pilamas tiriamasis mėginys, turi būti stikliniai, išplauti nejoninių ir anijoninių ploviklių mišiniu ir išskalauti vandeniu.
8.2. Konservavimo tirpalų paruošimas
8.2.1. Lugol'o tirpalo paruošimas
Į stiklinę su 1000 ml žyma įpilama 600 ml distiliuoto vandens. Nuolat maišant magnetine maišykle ištirpinama 20 g KJ, po to pridedama 10 g kristalinio jodo ir maišoma, kol jodas ištirpsta. Skiedžiama distiliuotu vandeniu iki 1000 ml tūrio, tirpalas gerai išmaišomas ir laikomas tamsaus stiklo butelyje.
8.2.2. Neutralaus formalino paruošimas
Formalinas neutralizuojamas lašinant sotų natrio bikarbonato tirpalą, nuolat maišant magnetine maišykle iki neutralios reakcijos.
8.3. Mėginių tipai ir jų ėmimas
Mėginiai imami pagal LST EN 25667-2:2001 (2.2).
Zooplanktono kiekybiniams mėginiams semti naudojamas planktoninis Apšteino tinklelis. Gali būti ir kitų konstrukcijų [6, 11].
8.3.1. Mėginio ėmimas upėse
Upėje vanduo semiamas prieš srovę 0,5 m gylyje 10 litrų talpos kibiru, filtruojamas per Apšteino tinklelį. Iš viso perfiltruojama 50 l vandens (5 x 10 l). Zooplanktono mėginys koncentruojamas Apšteino tinklelio stiklinaitėje, iš kurios turinys, atsukus kranelį, išpilamas į 100 ml talpos graduotą tamsaus stiklo buteliuką [6].
8 3.2. Mėginio ėmimas ežeruose ir vandens saugyklose
Sudėtiniai mėginiai imami batometru.
Kiekvienoje stotyje sudėtiniai mėginiai batometru imami tolygiais intervalais nuo ežero paviršiaus iki dugno, kaip parodyta 1 lentelėje.
Zooplanktono sudėtinio mėginio dalių skaičius ir vandens gylis
1 lentelė
Ežero gylis
Sudėtinio mėginio dalių skaičius
Horizontai, kuriuose imamos sudėtinio mėginio dalys
<2 m
2-4 m
4-8 m
8-15 m
>15 m
2
3
4
5
po mėginį iš kas trečio metro
(prieš tai paėmus visus mėginius iki 15 m gylio)
0,2; 1,5
0,2; 2,0; 3,5
0,2; 2,5; 4,5; 7,5
0,2; 3,5; 7,0; 10,5; 14,5
0,2; 3,5; 7,0; 10,5; 14;
18; 21; 24; 27; 30; 33; 36; 39; 42 ir t. t.
Pirmoji sudėtinio mėginio dalis visada paimama iš 0,2 m gylio, o paskutinė – 0,5 m virš ežero dugno.
Sudėtinio mėginio dalys iš visų gylių supilamos kartu į vieną indą, vėliau smarkiai maišant paimamas tam tikras kiekis filtravimui.
Imamas mėginio kiekis priklauso nuo zooplanktono gausumo, tad „maistinguose“ (eutrofiniuose) ežeruose paimama 4,5 l filtravimui, o „nemaistinguose“ (distrofiniuose) ežeruose – 9 l filtravimui.
Perfiltruotą vandenį iš stiklinaitės, esančios Apšteino tinkliuko gale, supilame į 100 ml buteliuką, praskalautą vandens telkinio vandeniu.
8.4. Mėginio konservavimas ir laikymas
Paimtas zooplanktono mėginys iš karto konservuojamas Lugol'o tirpalu, imant jo 1 % mėginio tūrio arba 40 % formaldehidu (formalinu), imant jo 4 % mėginio tūrio.
Naudojamas formalinas turi būti be nuosėdų, be to, rekomenduojama mėginius fiksuoti neutralizuotu formalinu, kadangi, esant rūgščiai terpės reakcijai, gali ištirpti ypač švelnūs zooplanktono individų šarveliai.
Prie buteliukų pritvirtinamos etiketės, užrašomas mėginio numeris, telkinio pavadinimas, vieta, data, vandens temperatūra ir kiti duomenys bei pastebėti gamtos reiškiniai.
Zooplanktono mėginiai saugomi tamsioje vietoje ne mažiau kaip 10 parų, kad visiškai įvyktų zooplanktono sedimentacija.
9. Procedūra
9.1. Mėginio paruošimas tyrimui
Po zooplanktono sedimentacijos (t. y. 10 parų) specialiai paruošta pipete (jos gale yra pritvirtintas tinklelis, kurio akutės dydis 0,064-0,081 mm), naudojantis gumine kriauše, nusiurbiamas viršutinis tiriamojo mėginio vandens sluoksnis. Graduotame buteliuke paliekama 10 ml mėginio tūrio, kuris visas supilamas į Bogorovo kamerą.
9.2. Tyrimo seka
9.2.1. Rūšinės sudėties nustatymas
Bogorovo kameroje esantis zooplanktono mėginys peržiūrimas binokuliariniu stereoskopiniu mikroskopu. Tiksliam rūšies nustatymui individas pipete perkeliamas ant objektinio stiklelio, kuris uždengiamas dengiamuoju stikliuku, ir preparatas peržiūrimas mikroskopu, didinančiu iki 1000 kartų. Zooplanktono rūšys identifikuojamos naudojantis vadovais apibūdintojais [7-10]. Gali būti naudojami ir kiti vadovai apibūdintojai.
9.2.2. Kiekybinis zooplanktono apskaitos metodas
Naudojant binokuliarinį stereoskopinį mikroskopą, identifikuoti organizmai suskaičiuojami Bogorovo kameroje. Duomenys įrašomi į blanką.
Paprastai visą zooplanktono mėginį supilame į Bogorovo kamerą, peržiūrime ir skaičiuojame neskiestą.
Tačiau, jei individų mėginyje yra gausiai ir neįmanoma jų suskaičiuoti, mėginys skiedžiamas 10-100 kartų distiliuotu vandeniu taip:
tiriamas vanduo iš Bogorovo kameros išpilamas į švarią stiklinaitę, iš jos pipete paimamas 1 ml turinio ir pilamas į kitą stiklinaitę, kurioje yra įpilta 9 ml distiliuoto vandens. Viskas gerai sumaišoma ir vėl supilama į Bogorovo kamerą. Skiedžiama tiek kartų, kol tampa įmanoma suskaičiuoti zooplanktono individus. Tada atskirai suskaičiuojami kiekvienos rūšies individai, nustatomas zooplanktono gausumas viename m3.
Organizmų gausumas 1 m3 suskaičiuojamas pagal formulę:
x = n×1000,
V
kur:
x – individų skaičius 1 m3 vandens, vnt./m3;
n – individų skaičius mėginyje, vnt.;
V – perfiltruoto vandens kiekis, l.
Pavyzdžiui, jei 10 ml tiriamo vandens rasti du zooplanktono individai, tai:
x = 2×1000 = 40 vnt./m3
50
Jeigu mėginys nustatymo metu buvo skiedžiamas, į formulę įvedamas skiedimo skaičius.
9.2.3. Zooplanktono biomasės nustatymas
Individuali zooplanktono individų biomasė yra apskaičiuojama naudojantis literatūra [1, 4, 5, 11].
9.2.4. Mėginio saprobiškumo indekso nustatymas
Vienas iš metodų, naudojamas vandens kokybei nustatyti pagal zooplanktoną, yra R. Pantle ir H. Buck indikatorinių organizmų metodas, modifikuotas V. Sladečeko [2, 3].
Šio metodo dėka įvairių vandens telkinių tyrimo rezultatus, išreikštus saprobiškumo indeksu, galime palyginti tarpusavyje.
Saprobiškumo indekso (S) nustatymui reikia žinoti kiekvienos mėginyje rastos rūšies indikatorinę reikšmę ir jos sutinkamumo dažnumą tiriamajame mėginyje. Indikatorinės zooplanktono individų reikšmės (s) nustatomos naudojantis saprobinių organizmų sąrašais [12, 13], o rūšies sutinkamumo dažnumas (h) apskaičiuojamas naudojantis šešių pakopų sutinkamumo dažnumo skale (2 lentelė).
Indikatorinių rūšių sutinkamumo dažnumo skalė
2 lentelė
Rūšies sutinkamumo
dažnumas
Santykinis vienos rūšies individų skaičius nuo bendro individų skaičiaus, išreikštas procentais, %
Rūšies sutinkamumo
dažnumas, h
Labai retai
£1
1
Retai
2-3
2
Neretai
4-10
3
Dažnai
11-20
5
Labai dažnai
21-40
7
Masiškai
41-100
9
Saprobiškumo indeksas (S) skaičiuojamas pagal formulę:
å (s ´ h)
S = ---------------------,
å h
kur:
s – indikatorinio organizmo saprobinis valentingumas;
h – indikatorinio organizmo sutinkamumo dažnumas.
Saprobiškumo indeksas (S) apskaičiuojamas 0,01 dalies tikslumu. Pagal mėginio saprobiškumo indeksą nustatoma vandens telkinio ar tirtos vietos saprobiškumo zona.
Saprobiškumo zonų lentelė
3 lentelė
Saprobiškumo zona
Saprobiškumo indekso skaitinės reikšmės
Ksenosaprobinė (x)
nuo 0 iki 0,50
Oligosaprobinė (o)
nuo 0,51 iki 1,50
Beta-mezosaprobinė (b)
nuo 1,51 iki 2,50
Alfa-mezosaprobinė (a)
nuo 2,51 iki 3,50
Polisaprobinė (p)
nuo 3,51 iki 4,00
Saprobiškumo indekso skaičiavimo pavyzdys pateiktas 4 lentelėje:
4 lentelė
Rūšies pavadinimas
Saprobiš-kumo zona
Rūšies saprobinis valentingumas, s
Rūšies sutinkamumo dažnumas, h
s × h
Rotatoria
Keratella cochlearis
b-0
1,55
1
1,55
„
Keratella quadrata
0-b
1,55
1
1,55
„
Lecane lunaris
0-b
1,35
5
6,75
„
Brachionus calyciflorus
b-a
2,50
2
5,00
„
Synchaeta pectinata
b-0
1,65
2
3,30
„
Asplanchna priodonta
0-b
1,55
1
1,55
Cladocera
Daphnia longispina
b
2,00
7
14,00
„
Chydorus sphaericus
b
1,75
2
3,50
„
Bosmina longirostris
0-b
1,55
3
4,65
Copepoda
Cyslops strenuus
b-a
2,25
2
4,50
„
Cyclops furcifer
0
1,20
2
2,40
S 28
S 48,75
å (s·h) 48,75
S = ______________ = ____________ = 1,74,
å h 28
S = 1,74
Pagal gautą mėginio saprobiškumo indekso skaitinę reikšmę (S-1,74) nustatome tirtos vietos saprobiškumo zoną (3 lentelė) [11].
10. Duomenų pateikimas
Zooplanktono tyrimų duomenys pateikiami lentelėse ir turi apimti šią informaciją:
mėginio numeris;
telkinio pavadinimas;
mėginio ėmimo vieta;
data, val.;
vandens temperatūra;
mėginyje nustatytų rūšių sąrašas;
nustatytas kiekvienos rūšies individų skaičius;
kiekvienos rūšies saprobinis valentingumas, (s);
rūšies sutinkamumo dažnumas, (h);
kiekvienos rūšies individų biomasė;
visų rastų mėginyje rūšių skaičius;
bendras individų gausumas mėginyje, išreikštas tūkst. vnt. m3;
visų rastų mėginyje individų biomasė, išreikšta mg3;
bendras mėginio saprobiškumo indeksas (S).
BIBLIOGRAFIJA
1. Dumont H. J., Van de Velde I. and Dumont S. The dry Weight Estimate of biomass in a selection of Cladocera, Copepoda and Rotifera from the plankton, periphyton and benthos of continenetal waters. – Oecologia (Berl) 1975, 19, 75 – 97.
2. Pantle R., Buck H. Die biologische Uberwachung der Gewasser und die Darstellung der Ergebnisse. – Gas und Wasserfach, 1955, H. 96 (18).
3. Sladeček V. System of Water Quality from the Biological point of view. – Arch. Hydrobiol. 1973, Bein. 7, 1-218.
4. Балушкина Е. В., Винберг Г. Г. Зависимость между длиной и массой тела планктонных ракообразных. – В кн.: Экспериментальные и полевые исследования биологических основ продуктивности озер. – Л., изд. АН СССР, 1979, с. 58-72.
5. Балушкина Е. В., Винберг Г. Г. Зависимость между массой и длиной тела у планктонных животных. – В кн.: Общие основы изучения водных экосистем. Л., Наука, 1979, с. 169-172.
6. Киселев И. А. Планктон морей и континентальных водоемов. – Изд. «Наука» Л., 1969, т. I.
7. Кутикова Л. А. Коловратки фауны СССР (Rotatoria). – Ленинград, 1970.
8. Мануйлова Е. Ф. Ветвистоусые рачки (Cladocera) фауны СССР. – Москва, 1960.
9. Рылов В. М. Фауна СССР. Ракообразные (Cyclopoida пресных вод). т. III, вып. 3. – Зоологический институт Академии Наук СССР, 1948.
10. Определитель пресноводных беспозвоночных Европейской части СССР. – Ленинград, 1977.
11. Руководство по методам гидробиологического анализа поверхностных вод и донных отложений. – Гидрометеоиздат, 1983.
12. Унифицированные методы исследования качества вод: Часть III. Mетоды биологического анализа вод, М., 1977.
13. Унифицированные методы исследования качества вод: Часть III. Mетоды биологического анализа вод, М., 1983.
______________
PATVIRTINTA
Lietuvos Respublikos aplinkos ministro
2003 m. gruodžio 24 d. įsakymu Nr. 708
CHLOROFILO „a“ KIEKIO NUSTATYMO
METODAS FITOPLANKTONE
LAND 56-2003
1. Taikymo sritis
Šiame normatyviniame dokumente pateikiamas metodas chlorofilo „a“ koncentracijai fitoplanktone nustatyti. Jo kiekio nustatymas yra taikomas dumblių pirminei produkcijai ir biomasei nustatyti bei leidžia vandens telkinio trofinei būklei ir eutrofikacijai įvertinti. Nustatytos chlorofilo „a“ koncentracijos, charakteringos atitinkamo trofiškumo vandens telkiniams, pateikiamos 1 lentelėje.
Chlorofilo „a“ koncentracija, atitinkanti vandens telkinio tipą [4].
Vandens telkinio tipas
Chlorofilo „a“ koncentracija,
mg/m3
Oligotrofinis
< 1,5
Mezotrofinis
1,5-10
Eutrofinis
10-30
Hipertrofinis
> 30
2. Normatyvinės nuorodos
Normatyvinis dokumentas parengtas remiantis šiais dokumentais:
2.1. LST 1426:1996. Vandens savybės. Terminai ir apibrėžimai.
2.2. LST EN 25667-2:2001. Vandens kokybė. Mėginių ėmimas. 2 dalis. Nurodymai, kaip imti mėginius (ISO 5667-2:1991).
2.3. LST EN ISO 3696:1996 Analizės vanduo. Apibūdinimas ir bandymo metodai.
2.4. Lietuvos HN 23:2001. Kenksmingų cheminių medžiagų koncentracijų ribinės vertės darbo aplinkos ore.
3. Terminai ir apibrėžimai
3.1. Eutrofikacija – gėlųjų arba sūriųjų vandenų įsodrinimas biogeninėmis medžiagomis, ypač azoto ir fosforo junginiais, skatinančiais dumblių ir aukštesniųjų augalų augimą.
3.2. Mezotrofinis vanduo – vidutinio trąšumo vanduo (tarp oligotrofinio ir eutrofinio).
3.3 Oligotrofinis vanduo – paviršinis vanduo, kuriame yra nedaug įvairių organizmų. Telkinys skaidrus, turi didelę deguonies koncentraciją viršutiniame sluoksnyje ir rusvas dugno nuosėdas, kuriose mažai organinių medžiagų.
3.4. Eutrofinis vanduo – vanduo, kuriame palankios gyvūnams gyventi sąlygos, gausu biogeninių elementų.
3.5. Distrofinis vanduo – mažai biogeninių ir daug humusinių medžiagų turintis vanduo.
3.6. Metalimnionas (terminis sprūdis) – temperatūriškai susisluoksniavusio vandens telkinio sluoksnis, kuriame temperatūros gradientas didžiausias.
3.7. Epilimnionas – vanduo, esantis virš terminio sprūdžio.
3.8. Hipolimnionas – vanduo, esantis žemiau terminio sprūdžio.
3.9. Centrifugavimas – nuosėdų nusodinimas išcentrine jėga.
3.10. Chlorofilas „a“ – fotosintezę atliekančių ląstelių pigmentas.
4. Principas
Dumbliai ir kitos skendinčios medžiagos iš vandens mėginio surenkami filtruojant. Pigmentai ekstrahuojami 90 % acetonu. Chlorofilo „a“ koncentracija nustatoma spektrofotometriniu metodu. Tuščio mėginio ir tiriamo mėginio absorbcijos vertė matuojama esant 750, 663, 645, 630 nm bangų ilgiams su 1 cm storio kiuvete [1, 2, 3].
5. Reagentai ir medžiagos
Leidžiama vartoti tik apibrėžtos analizinės kvalifikacijos reagentus ir distiliuotą vandenį, atitinkantį 3 kokybės lygio analizės vandenį (2.3).
5.1. Acetonas (CH3COCH3) – 90 %;
5.2. kalcio karbonatas (CaCO3) – 1 % suspensija.
6. Naudojama įranga, prietaisai ir indai
6.1. Vakuuminis siurblys;
6.2. membraninio filtravimo įrenginys;
6.3. centrifuga – ne mažiau kaip 6 000 aps./min.;
6 4. spektrofotometras – bangos ilgio nustatymo tikslumas ± 2,0 nm;
6.5. 1 cm optinio sluoksnio storio kvarcinio stiklo kiuvetė;
6.6. membraniniai filtrai (filtrų porų dydis – 0,45 μm – 1,0 μm);
6.7. indai (1-5) l talpos, pagaminti iš šviesai nejautrių medžiagų arba neaktininio stiklo su sandariais kamščiais (2.2);
6.8. graduoti centrifuginiai polipropileno mėgintuvėliai su užsukamais kamščiais (ne mažiau kaip 10 ml talpos);
6.9. mėgintuvėliai su šlifuotais kamščiais;
6.10. matavimo kolbos su žyma (100; 250; 500; 1000) cm3;
6.11. graduotos pipetės (1; 5) cm3;
6.12. pergamentinis popierius;
6.13. filtrinis popierius;
6.14. automobilinis šaldytuvas.
7. Darbų sauga
Atliekant tyrimus reikia vadovautis bendraisiais darbų saugos reikalavimais.
8. Mėginys
8.1. Indų paruošimas
Indai, kontaktuojantys su tiriamuoju mėginiu, turi būti gerai išplauti nejoninių ir anijoninių ploviklių mišiniu ir gerai išskalauti vandeniu.
8.2. Mėginio ėmimas
Mėginiai imami pagal LST EN 25667-2:2001 (2.2).
8.2.1. Mėginio ėmimas upėse
Upėse, kur fitoplanktono vertikalus pasiskirstymas sąlyginai yra tolygus, vanduo žinomo tūrio indu semiamas iš paviršinio vandens sluoksnio, panardinus indą į telkinį prieš srovę 15-20 cm gylyje, upės viduryje.
PASTABA. Indas atidaromas tik panardinus jį į nustatytą gylį ir uždaromas po to, kai prisipildo sklidinas vandens.
8.2.2. Mėginio ėmimas ežeruose ir vandens saugyklose
Ežeruose ir vandens saugyklose imami dviejų tipų vandens mėginiai:
1) vienkartinis mėginys – iš paviršinio vandens sluoksnio;
2) sudėtinis mėginys – iš kelių mėginių.
8.2.2.1. Vienkartinis mėginys
Vienkartiniai paviršinio vandens sluoksnio mėginiai imami ežero epilimnione, 0,5 m gylyje, batometru arba 1 litro talpos buteliu (8.2.1)
8.2.2.2. Sudėtinis mėginys
Sudėtinis mėginys gaunamas imant mėginius toje pačioje vietoje vienodais tūriais iš skirtingų gylių ir juos sumaišant.
Pirmiausia, prieš imant sudėtinį mėginį, baltu Secchi disku iš valties šešėlinės pusės pamatuojamas vandens skaidrumas. Gautas dydis suapvalinamas iki artimiausio pilno arba pusės decimetro. Po to matuojama vandens temperatūra. Vandens temperatūra matuojama kas metrą, einant gilyn (pradedama nuo 0,2 m).
Paprastai imamas tik vienas sudėtinis mėginys, bet jeigu šviesos sritis sluoksniuotuose ežeruose tęsiasi žemiau terminio sprūdžio sluoksnio (metalimniono), imamas sudėtinis mėginys ir iš hipolimniono.
Sudėtinių vandens mėginių ėmimas, atsižvelgiant į vandens gylį, šviesos sritį ir terminio sprūdžio sluoksnį:
1) Mėginių ėmimas iš ežerų be terminio sprūdžio sluoksnio
A. Kai vandens telkinio gylis yra < 1,5 m, vieno litro (1l) tūrio vandens mėginiai batometru imami iš:
1) 0,2 m gylio;
2) 1,0 m gylio, bet ne giliau, kadangi reikia vengti priedugnės sluoksnio. Šių ežerų šviesos sritis būna nedidelė ir riba tarp vandens ir nuosėdų neryški (šviesos sritis – tai sritis nuo vandens paviršiaus iki skaidrumo gylio [pagal Secchi diską] padauginto iš 2).
Iš šių gylių paimti 1l tūrio vandens mėginiai kibire atsargiai sumaišomi ir pasemiamas 1l tūrio vandens mėginys.
B. Kai vandens telkinio gylis yra > 1,5 m, 1l tūrio vandens mėginiai imami vienodais intervalais, kas 2 gylio m, bet giliausiai – iki dvigubo skaidrumo gylio (skaidrumo gylis pagal Secchi diską padaugintas iš 2).
Sudėtinio mėginio ėmimo lentelė
Skaidrumo gylis, pagal Secchi diską,
m
Dvigubo skaidrumo gylis,
m
Sudėtinio mėginio ėmimo gyliai,
m
2,0
3,0
4,0
5,0
4,0
6,0
8,0
10,0
0,2; 2,0; 4,0
0,2; 2,0; 4,0; 6,0
0,2; 2,0; 4,0; 6,0; 8,0
0,2; 2,0; 4,0; 6,0; 8,0; 10,0
1l tūrio vandens mėginiai, paimti iš skirtingų gylių, kibire atsargiai sumaišomi ir pasemiamas 1l tūrio mėginys chlorofilui „a“ nustatyti.
2) Mėginių ėmimas iš ežerų su terminio sprūdžio sluoksniu
A. Kai vandens telkinio šviesos sritis (skaidrumo gylis x 2) yra virš hipolimniono (1 pav.), 1l tūrio vandens mėginiai imami kas 2 m iki dvigubo skaidrumo gylio, bet giliausiai – iki terminio sprūdžio sluoksnio apačios (epilimnionas + metalimnionas). Šie mėginiai, paimti iš skirtingų gylių, kibire sumaišomi ir paimamas 1 l tūrio sudėtinis mėginys chlorofilui „a“.
1 pav. Terminiai sluoksniai: 1 – epilimnionas, 2 – metalimnionas, 3 – hipolimnionas.
Pavyzdys:
Jeigu vandens telkinio skaidrumas yra 4,2 m, o terminio sprūdžio sluoksnio storis (metalimnionas) yra nuo 4,0 m iki 8,0 m, tai daliniai 1 l tūrio vandens mėginiai turi būti imami iš šių gylių: 0,2; 2,0; 4,0; 8,0 m
B. Kai vandens telkinio šviesos sritis tęsiasi hipolimnione, tada imami du sudėtiniai vandens mėginiai.
Pirmą sudėtinį mėginį sudarys vienodais intervalais iki metalimniono viršaus kas 2 gylio m paimti 1 l tūrio vandens mėginiai.
Antrą sudėtinį mėginį sudarys vienodais intervalais kas 2 gylio m paimti 1 l tūrio vandens mėginiai. Jie paimti iš tos hipolimniono dalies, kurią pasiekia šviesos sritis.
Pavyzdys:
Jeigu ežero šviesos sritis yra 12,6 m (pagal Secchi diską 6,3 x 2), o terminio sprūdžio sluoksnis (metalimnionas) siekia nuo 4,0 iki 8,0 m, imami 2 sudėtiniai vandens mėginiai:
Pirmąjį sudėtinį mėginį sudarys mėginiai, paimti iš tokių gylių:
0,2; 2,0; 4,0; 6,0 m.
Antrąjį sudėtinį mėginį sudarys mėginiai, paimti hipolimnione iš šių gylių:
8,0; 10,0; 12,0 m.
Pasemti vieno litro tūrio vandens mėginiai iš įvairių horizontų vertikalėje supilami į emaliuotą arba polietileno kibirą. Atsargiai sumaišius, paimamas sudėtinis 1 litro vandens mėginys.
Mėginys turi būti atšaldytas ir laikomas tamsoje, temperatūroje nuo (1 iki 8) oC, ne ilgiau kaip 8 valandas.
9. Procedūra
9.1. Mėginio paruošimas
Mėginys atsargiai sujudinamas, nepažeidžiant gležnų dumblių formų, ir padalijamas į dvi dalis, pavyzdžiui po 500 ml.
9.2. Mėginio filtravimas
500 ml mėginio filtruojama per membraninį filtrą, kurio porų dydis – (0,45-1,0) μm, sudarant vakuumą, ne didesnį kaip 0,5 atm. Prieš baigiant filtruoti surinktas fitoplanktonas užpilamas 1 ml 1 % CaCO3 suspensija – viduląstelinių rūgščių neutralizavimui [3].
Filtras išdžiovinamas kambario temperatūroje, tamsoje, sulankstomas į keturias dalis ir perkeliamas į centrifuginius mėgintuvėlius su užsukamais kamščiais tolesniam analizavimui.
9.3. Nustatymo seka
9.3.1. Chlorofilo „a“ ekstrakcija
Mėgintuvėlis su filtru užpilamas 0,5 ml distiliuoto vandens ir dviem valandom patalpinamas į buitinį šaldytuvą prie (6 ± 2) oC temperatūros ląstelių išbrinkimui [3].
P …
DI paaiškinimas pagal oficialų įstatymo tekstą. Orientacinis, nepakeičia teisinės konsultacijos.