← Danmark

sø- & handelsrettens dombog

- maj udskrift af sø- & handelsrettens dombog ____________ dom afsagt den 31. august 2017 t-8-12 pharma nord aps (advokat søren dines larsen) mod biosym a/s (advokat karsten madsen) t-14-12 (hovedintervention) lallemand human nutrition a/s (advokat peter-ulrik plesner) mod pharma nord aps (advokat søren dines larsen) sagernes baggrund disse sager handler navnlig om, hvorvidt pharma nord aps’ (pharma nords) patenter, dk 174835 (det danske stridspatent / stridspatent 1) og dk/ep 1478732 (det europæiske stridspa- -2- tent / stridspatent 2), er gyldige, og i så fald om selengærprodukterne lalmin se1000, lalmin se1200 og lalmin se2000, der er produceret af lallemand human nutrition a/s (lallemand) og er indeholdt i de af biosym a/s (biosym) solgte produkter, krænker stridspatenterne. sagen mod biosym (rettens sagsnr. t-8-12) er anlagt af pharma nord den 3. september 2012. hovedinterventionssagen mod pharma nord (rettens sagsnr. t-14-12) er anlagt af lallemand den 1. november 2012. parternes påstande sag t-8-12 pharma nord har over for biosym nedlagt følgende påstande: 1. biosym skal anerkende at have krænket pharma nords patent dk 174835 ved at lade fremstille og sælge kosttilskud, der indeholder selenberiget gær; hvor (

  1. i)koncentratio- nen af selen er mellem 1.000 og 1.600 ppm (mg/kg); (
  2. ii)koncentrationen af selen i form af l-selenmethionin udgør mindst 55 % af det totale indhold af selen; og (iii) koncen- trationen af uorganiske selenforbindelser højest udgør 1 % af det samlede indhold af selen. 2. biosym skal anerkende at have krænket pharma nords patent dk/ep 1478732 ved at lade fremstille og sælge kosttilskud, der indeholder selenberiget gær; hvor (
  3. i)koncen- trationen af selen er mellem 1.000 og 1.600 ppm (mg/kg); (
  4. ii)koncentrationen af selen i form af l-selenmethionin udgør mindst 55 % af det totale indhold af selen; og (iii) kon- centrationen af uorganiske selenforbindelser højest udgør 1 % af det samlede indhold af selen. 3. det forbydes biosym i danmark at fremstille, udbyde og bringe i omsætning eller an- vende kosttilskud, andre fødevarer eller lægemidler indeholdende selenberiget gær; hvor (
  5. i)koncentrationen af selen er mellem 1.000 og 1.600 ppm (mg/kg); og (
  6. ii)koncen- -3- trationen af selen i form af l-selenmethionin udgør mindst 55 % af det totale indhold af selen; og (iii) koncentrationen af uorganiske selenforbindelser højest udgør 1 % af det samlede indhold af selen, eller importere eller besidde det med sådant formål, så længe patent dk 174835 er i kraft. 4. det forbydes biosym i danmark at fremstille, udbyde, bringe i omsætning eller anven- de kosttilskud, andre fødevarer eller lægemidler indeholdende selenberiget gær; hvor (
  7. i)koncentrationen af selen er mellem 1.000 og 1.600 ppm (mg/kg); og (
  8. ii)koncentrati- onen af selen i form af l-selenmethionin udgør mindst 55 % af det totale indhold af se- len; og (iii) koncentrationen af uorganiske selenforbindelser højest udgør 1 % af det samlede indhold af selen, eller importere eller besidde det med sådant formål, så længe patent dk/ep 1478732 er i kraft. 5. biosym skal anerkende at fremstilling og salg af kosttilskud, andre fødevarer eller læ- gemidler indeholdende produktet lalmin se2000 efter en ækvivalensvurdering kræn- ker pharma nords patent dk 174835. 6. biosym skal anerkende at fremstilling og salg af kosttilskud, andre fødevarer eller læ- gemidler indeholdende produktet lalmin se2000 efter en ækvivalensvurdering kræn- ker pharma nords patent dk/ep 1478732. 7. det forbydes biosym i danmark at fremstille, udbyde, bringe i omsætning eller anven- de kosttilskud, andre fødevarer eller lægemidler indeholdende produktet lalmin se2000, så længe patent dk 174835 er i kraft. 8. det forbydes biosym i danmark at fremstille, udbyde, bringe i omsætning eller anven- de kosttilskud, andre fødevarer eller lægemidler indeholdende produktet lalmin se2000, så længe patent dk/ep 1478732 er i kraft. -4- 9. biosym skal anerkende, at biosym i henhold til patentlovens § 58 er forpligtet til at be- tale vederlag, erstatning og godtgørelse til pharma nord som følge af biosyms kræn- kelse af pharma nords patent dk 174835 og/eller patent dk/ep 1478732. biosym har over for pharma nords påstande 1-2 og 7-8 nedlagt påstand om frifindelse. over- for pharma nords påstande 3-6 og 9 har biosym principalt nedlagt påstand om afvisning, subsidiært frifindelse. sag t-14-12 lallemand har over for pharma nord nedlagt følgende påstande: 1. patent dk 174835 kendes ugyldigt. 2. patent dk/ep 1478732 kendes ugyldigt. 3. pharma nord skal anerkende, at markedsføring af selengærprodukter indeholdende lalmin se1000, lalmin se1200 og lalmin se2000 ikke krænker patent dk 174835 og pa- tent dk/ep 1478732. 4. pharma nord skal anerkende, at selengærprodukter med
  9. a)organiske selenforbindel- ser svarende til mellem 1.000 og 1.600 ppm selen,
  10. b)hvor l-selenmethionin udgør mindst 55 % af det samlede indhold af selen, og
  11. c)hvor indholdet af selen i uorganiske selenforbindelser højst udgør 1 % af det samlede indhold af selen, der er fremstillet ved en metode, hvori melasse udgør mindst 85 % af kilden til carbon i tilløbsmediet, ikke krænker patent dk/ep 1478732 og patent dk 174835. pharma nord har over for lallemands påstand 1 nedlagt følgende påstande: principalt: frifindelse med opretholdelse af patent dk 174835 i uændret form. -5- subsidiært: frifindelse mod opretholdelse af patent dk 174835 med følgende ændrede krav 7, mens krav 8 – 10 slettes: 7. anvendelse af et selengærprodukt til brug i fødevarer, kosttilskud eller lægemidler, kendetegnet ved,
  12. a)et indhold af organiske selenforbindelser svarende til mellem 1.000 og 1.600 ppm selen, fortrinsvis mellem 1.100 ppm og 1.500 ppm selen, mest fortrinsvis mellem 1.200 ppm og 1.400 ppm selen,
  13. b)at indholdet af selen i form af l-selenmethionin konstant udgør mindst 55 % af det samlede indhold af selen, at indholdet af selen i uorganiske se- lenforbindelser udgør højst 1 % af det samlede indhold af selen,
  14. c)at se- lengærproduktet er opnåeligt ved dyrkning af en gærkultur og isolering af gæren opnået ved dyrkningen, hvilken dyrkning omfatter,
  15. i)at nærings- stoffer tilledes gæren under dyrkning i et omfang, som svarer til omsæt- ningen af disse næringsstoffer i gæren;
  16. ii)at glucose og/eller maltose er eneste kilder til carbon i tilløbsmediet; iii) at koncentrationen af ethanol under dyrkningen ikke overstiger 1 %, foretrukket 0,5 %, og mest foretruk- ket 0,2 %;
  17. iv)at ph under dyrkningen opretholdes mellem 4,0 – 6,0, fore- trukket mellem 4,4 – 5,7, mest foretrukket mellem 4,7 – 5,4, såsom 5,0; og
  18. v)at tilløbsmediet iblandes et vandopløseligt salt af selen i en mængde sva- rende til mellem 1.000 og 1.500 ppm selen, beregnet på tørstof i gæren, til fremstilling af et kosttilskud, et lægemiddel eller en fødevare. mere subsidiært: frifindelse mod opretholdelse af patent dk 174835 med uændrede krav 1 – 6, mens krav 7 – 10 slettes. pharma nord har over for lallemands påstand 2 nedlagt følgende påstande: principalt: frifindelse mod opretholdelse af patent dk/ep 1478732 med ændret krav 7: -6- 1. fremgangsmåde til fremstilling af et selengærprodukt til brug i fødeva- rer, kosttilskud eller lægemidler, hvorved gæren dyrkes på et minimalme- dium under aerobe betingelser, kendetegnet ved trinene:
  19. a)dyrkning af gæren, hvilket omfatter
  20. i)at næringsstoffer og selen tilledes gæren under dyrknin- gen i et omfang, som svarer til omsætningen af disse næ- ringsstoffer og selen i gæren;
  21. ii)at glucose og/eller maltose er de eneste kilder til carbon i tilløbsmediet; iii) at koncentrationen af ethanol under dyrkningen ikke overstiger 1 %, fortrinsvis ikke overstiger 0,5 %, og mest foretrukket ikke overstiger 0,2 %;
  22. iv)at ph under dyrkningen opretholdes mellem 4,0 – 6,0, fo- retrukket mellem 4,4 – 5,7, mest foretrukket mellem 4,7 – 5,4, såsom 5,0; og
  23. v)at tilløbsmediet iblandes et vandopløseligt salt af selen i en mængde svarende til mellem 1.000 og 1.500 ppm selen, be- regnet på tørstof i gæren,
  24. b)isolering af gæren opnået fra trin (a). 2. fremgangsmåde ifølge krav 1, kendetegnet ved, at isoleringen omfatter høst ved centrifugering eller filtrering. 3. fremgangsmåde ifølge krav 1, kendetegnet ved, at den yderligere omfat- ter trinene:
  25. c)vask af gærcellerne fra trin (b),
  26. d)varmebehandling af gærcellerne fra trin (c), og
  27. e)eventuel tørring af produktet fra trin (d). 4. fremgangsmåde ifølge et hvilket som helst af kravene 1 – 3, kendetegnet ved, at minimalmediet er sammensat af råvarer af farmaceutisk kvalitet. -7- 5. fremgangsmåde ifølge et hvilket som helst af kravene 1 – 4, kendetegnet ved, at gæren omfatter en art tilhørende slægten saccharomycetaceae, for- trinsvis saccharomyces cerevisiae, saccharomyces boulardii sequela og/eller sac- charomyces torula. 6. fremgangsmåde ifølge krav 5, kendetegnet ved, at gæren er saccharomy- ces cerevisiae. 7. selengærprodukt til brug i fødevarer, kosttilskud eller lægemidler, ken- detegnet ved,
  28. a)et indhold af organiske selenforbindelser svarende til mellem 1.000 og 1.600 ppm selen, og ved
  29. b)at indholdet af l-selenmethionin konstant udgør mindst 55 % af det samlede indhold af selen, og ved
  30. c)at indholdet af selen i uorganiske selenforbindelser højst udgør 1 % af det samlede indhold af selen, og ved
  31. d)at den kan opnås ved en fremgangsmåde ifølge et hvilket som helst af kravene 1 – 6. 8. anvendelse af selengærproduktet ifølge krav 7, til fremstilling af en fø- devare. 9. anvendelse af selengærproduktet ifølge krav 7, til fremstilling af et kost- tilskud. 10. anvendelse af selengærproduktet ifølge krav 7, til fremstilling af et læ- gemiddel. subsidiært: frifindelse med opretholdelse af patent dk/ep 1478732 i uændret form. mere subsidiært: frifindelse mod opretholdelse af patent dk/ep 1478732 med ændret krav 7, mens krav 8 – 10 slettes: -8- 1. fremgangsmåde til fremstilling af et selengærprodukt til brug i fødeva- rer, kosttilskud eller lægemidler, hvorved gæren dyrkes på et minimalme- dium under aerobe betingelser, kendetegnet ved trinene:
  32. a)dyrkning af gæren, hvilket omfatter
  33. i)at næringsstoffer og selen tilledes gæren under dyrknin- gen i et omfang, som svarer til omsætningen af disse næ- ringsstoffer og selen i gæren;
  34. ii)at glucose og/eller maltose er de eneste kilder til carbon i tilløbsmediet; iii) at koncentrationen af ethanol under dyrkningen ikke overstiger 1 %, fortrinsvis ikke overstiger 0,5 %, og mest foretrukket ikke overstiger 0,2 %;
  35. iv)at ph under dyrkningen opretholdes mellem 4,0 – 6,0, fo- retrukket mellem 4,4 – 5,7, mest foretrukket mellem 4,7 – 5,4, såsom 5,0; og
  36. v)at tilløbsmediet iblandes et vandopløseligt salt af selen i en mængde svarende til mellem 1.000 og 1.500 ppm selen, be- regnet på tørstof i gæren,
  37. b)isolering af gæren opnået fra trin (a). 2. fremgangsmåde ifølge krav 1, kendetegnet ved, at isoleringen omfatter høst ved centrifugering eller filtrering. 3. fremgangsmåde ifølge krav 1, kendetegnet ved, yderligere at den yderli- gere omfatter trinene:
  38. c)vask af gærcellerne fra trin (b),
  39. d)varmebehandling af gærcellerne fra trin (c), og
  40. e)eventuel tørring af produktet fra trin (d). 4. fremgangsmåde ifølge et hvilket som helst af kravene 1 – 3, kendetegnet ved, at minimalmediet er sammensat af råvarer af farmaceutisk kvalitet. -9- 5. fremgangsmåde ifølge et hvilket som helst af kravene 1 – 4, kendetegnet ved, at gæren omfatter en art tilhørende slægten saccharomycetaceae, for- trinsvis saccharomyces cerevisiae, saccharomyces boulardii sequela og/eller sac- charomyces torula. 6. fremgangsmåde ifølge krav 5, kendetegnet ved, at gæren er saccharomy- ces cerevisiae. 7. selengærprodukt til brug i fødevarer, kosttilskud eller lægemidler, ken- detegnet ved,
  41. a)et indhold af organiske selenforbindelser svarende til mellem 1.000 og 1.600 ppm selen, og ved
  42. b)at indholdet af l-selenmethionin konstant udgør mindst 55 % af det samlede indhold af selen, og ved
  43. c)at indholdet af selen i uorganiske selenforbindelser højst udgør 1 % af det samlede indhold af selen, og ved
  44. d)at den kan opnås ved en fremgangsmåde ifølge et hvilket som helst af kravene 1 – 6, til fremstilling af et kosttilskud, et lægemiddel eller en fødevare. mest subsidiært: frifindelse mod opretholdelse af patent dk/ep 1478732 med uændrede krav 1 – 6, mens krav 7 – 10 slettes. pharma nord har over for lallemands påstand 3 principalt nedlagt påstand om frifindelse, subsidiært frifindelse mod, at pharma nord anerkender, at markedsføring af selengærpro- dukter indeholdende lalmin se2000 ikke krænker patent dk 147835 og patent dk/ep 1478732. pharma nord har over for lallemands påstand 4 principalt nedlagt påstand om afvisning, subsidiært frifindelse. - 10 - lallemand har nedlagt påstand om frifindelse over for pharma nords principale og subsidiæ- re påstande vedrørende opretholdelse af patent dk 174835 og patent dk/ep 1478732 med ændrede kravsæt. oplysninger i sagerne parterne pharma nord pharma nord driver virksomhed med udvikling, produktion, markedsføring og salg af kost- tilskud og lægemidler. pharma nord producerer, markedsfører og sælger som kosttilskud blandt andet produktet selenoprecise, der indeholder selenberiget gær (selengær). seleno- precise indeholder ifølge pharma nord selengær i henhold til stridspatenterne. biosym biosym beskæftiger sig med markedsføring og salg af kosttilskud samt vitamin- og mineral- præparater. i flere af biosyms produkter anvendes selengær, bl.a. i multivitaminmineralpro- dukterne omni selen, omni x, omni mini og omni vegan, som nærværende sager angår. biosym har ikke egen produktion af multivitaminmineralprodukter, men lader sine produk- ter fremstille hos selvstændige lønproducenter. de fire ovennævnte produkter fremstilles så- ledes af underleverandøren viminco a/s. det er ubestridt, at viminco a/s har indkøbt se- lengær til brug for produkterne fra lallemand. det er oplyst, at biosym har anvendt se- lengær i omni selen siden den 27. februar 2006, i omni x siden den 8. marts 2006, i omni mini siden den 31. august 2009 og i omni vegan siden den 28. oktober 2010. pharma nord rettede den 13. juni 2012 henvendelse til viminco a/s, idet pharma nord gjor- de gældende, at der ved produktionen af biosyms omni selen blev anvendt selengær med en styrke og specifikation, som krænkede pharma nords stridspatenter. dette var efter det oplyste første henvendelse fra pharma nord i anledning af biosyms anvendelse af den om- handlede selengær i sine produkter. - 11 - lallemand lallemand er en del af lallemand-koncernen, der er en verdensomspændende producent af ingredienser m.v. til foder og fødevarer, herunder af selengær. lallemands selengærproduk- ter til human anvendelse sælges under handelsnavnene lalmin se1000, lalmin se1200 og lalmin se2000 ld samt til anvendelse i dyrefoder under handelsnavnet alkosel, jf. nærmere om lallemands selengærprodukter og fremstillingsproces nedenfor. stridspatenterne, herunder stridspatenternes tilblivelseshistorie det danske stridspatent pharma nord fik den 15. december 2013 udstedt patent på et selengærprodukt, en frem- gangsmåde til fremstilling af et selengærprodukt samt en anvendelse af produktet til frem- stilling af en fødevare, et kosttilskud eller et lægemiddel. opfinderne er i stridspatentet an- givet som sven moesgaard og helge paulin. det danske stridspatent indeholder følgende krav: ”… 1. fremgangsmåde til fremstilling af et selengærprodukt til brug i fødevarer, kosttilskud eller lægemidler, hvorved gæren dyrkes på et minimalmedium under ae- robe forhold, kendetegnet ved, trinene:
  45. a)dyrkning af gæren, hvilket omfatter
  46. i)at næringsstoffer tilledes gæren under dyrkningen i et omfang, som svarer til omsætningen af disse næringsstoffer i gæren;
  47. ii)at glucose og/eller maltose er de eneste kilder til carbon i tilløbsmedi- et; iii) at koncentrationen af ethanol under dyrkningen ikke overstiger 1 %, foretrukket 0,5 %, og mest foretrukket 0,2 %;
  48. iv)at ph under dyrkningen opretholdes mellem 4,0 – 6,0, foretrukket mellem 4,4 – 5,7, mest foretrukket mellem 4,7 – 5,4, såsom 5,0; og - 12 -
  49. v)at tilløbsmediet iblandes et vandopløseligt salt af selen i en mængde svarende til mellem 1.000 og 1.500 ppm selen, beregnet på tørstof i gæren,
  50. b)isolering af gæren opnået fra trin (a). 2. fremgangsmåde ifølge krav 1, kendetegnet ved, at isoleringen omfatter høst ved centrifugering. 3. fremgangsmåde ifølge krav 1, kendetegnet ved, yderligere at omfatte trine- ne:
  51. c)vask af gærcellerne fra trin (b),
  52. d)varmebehandling af gærcellerne fra trin (c), og
  53. e)eventuel tørring af produktet fra trin (d). 4. fremgangsmåde ifølge et hvilket som helst af kravene 1-3, kendetegnet ved, at minimalmediet er sammensat af råvarer af farmaceutisk kvalitet. 5. fremgangsmåde ifølge et hvilket som helst af kravene 1-4, kendetegnet ved, at gæren omfatter en art tilhørende slægten saccharomycetaceae, fortrinsvis saccharo- myces cerevisiae, saccharomyces boulardii sequela og/eller saccharomyces torula. 6. fremgangsmåde ifølge krav 5, kendetegnet ved, at gæren er saccharomyces cerevisiae. 7. selengærprodukt til brug i fødevarer, kosttilskud eller lægemidler, kende- tegnet ved,
  54. a)et indhold af organiske selenforbindelser svarende til mellem 1.000 og 1.600 ppm selen, fortrinsvis mellem 1.100 ppm og 1.500 ppm, mest fortrinsvis mel- lem 1.200 ppm og 1.400 ppm,
  55. b)at indholdet af l-selenomethionin konstant udgør mindst 55 % af det samle- de indhold af selen, at indholdet af selen i uorganiske selenforbindelser ud- gør højst 1 % af det samlede indhold af selen,
  56. c)at selengærproduktet er opnåeligt ved dyrkning af en gærkultur og isolering af gæren opnået ved dyrkningen, hvilken dyrkning omfatter
  57. i)at næringsstoffer tilledes gæren under dyrkningen i et omfang, som svarer til omsætningen af disse næringsstoffer i gæren;
  58. ii)at glucose og/eller maltose er de eneste kilder til carbon i tilløbsmedi- et; iii) at koncentrationen af ethanol under dyrkningen ikke overstiger 1 %, foretrukket 0,5 %, og mest foretrukket 0,2 %; - 13 -
  59. iv)at ph under dyrkningen opretholdes mellem 4,0 – 6,0, foretrukket mellem 4,4 – 5,7, mest foretrukket mellem 4,7 – 5,4, såsom 5,0; og
  60. v)at tilløbsmediet iblandes et vandopløseligt salt af selen i en mængde svarende til mellem 1.000 og 1.500 ppm selen, beregnet på tørstof i gæren. 8. anvendelse af selengærproduktet ifølge krav 7, til fremstilling af en fødeva- re. 9. anvendelse af selengærproduktet ifølge krav 7, til fremstilling af et kosttil- skud. 10. anvendelse af selengærproduktet ifølge krav 7, til fremstilling af et læge- middel.” om baggrunden for det danske stridspatent er det i patentet anført bl.a.: ”… teknisk område: den foreliggende opfindelse angår et selengærprodukt til brug i fødevarer, kosttil- skud eller lægemidler, og som indeholder betydelige og ensartede mængder af let- fordøjeligt og veltolerabelt, organisk bundet selen. endvidere angår opfindelsen en fremgangsmåde til fremstilling af dette selengærprodukt samt anvendelse af se- lengærproduktet til fremstilling af en fødevare, et kosttilskud eller et lægemiddel. kendt teknik: selen er et grundstof, som er essentielt i menneskets ernæring. tilførsel af selen sker gennem kosten, som imidlertid har et varierende indhold af selen. i store dele af ver- den dyrkes afgrøder med ringe indhold af selen, idet mængden af dette grundstof i jordbunden er beskeden. betydningen af selen for mennesket er fastslået gennem et større antal undersøgelser. selen indbygges i forskellige organiske molekyler, herunder især aminosyrer. l- selenomethionin, selenocystein, selenocystin og selenoethionin er de vigtigste forbin- delser. selen indgår således i proteiner, der har strukturel betydning i kroppen. end- videre er selen en vigtig bestanddel af en række enzymer, som har indflydelse på stofskifte, forplantning, kræftforebyggelse, immunforsvar og psyke hos mennesket (rayman, m., the importance of selenium to human health, lancet 356:233-241

(2000)). på grund af det ofte utilstrækkelige indhold af selen i almindelig kost er det hen- sigtsmæssigt at tilføre selen i form af berigelse, kosttilskud eller lægemidler. disse kan have et indhold af uorganisk selen som f.eks. selenit, eller de kan bestå af organi- ske kilder, herunder selengær. der er væsentlig forskel på absorption og toksicitet af uorganisk og organisk selen, idet uorganiske forbindelser sædvanligvis absorberes - 14 - betydeligt dårligere, og tillige er mere toksiske end organiske kilder til selen. en ofte anvendt kilde til organisk selen er gær med indhold af selen. ved dyrkning af gær er det muligt at tilføre næringsmediet selen i form af uorganiske forbindelser, herunder natriumselenit og natriumselenat. selen, der tilføres nærings- mediet på denne måde, optages i vid udstrækning af gær og indbygges i organiske forbindelser, herunder l-selenomethionin. selengær kan fremstilles ved brug af en række arter af gær, herunder saccharomyces cerevisiae, saccharomyces boulardii sequela og saccharomyces torula, og ved anvendelse af forskellige dyrkningsbetingelser. herved kan dannes et variabelt udvalg af organiske forbindelser af selen i gæren. reproducerbarhed ved brug af kendte fremgangsmåder kan være utilfredsstillende. dårlig reproducerbarhed har givet anledning til mang- lende accept af selengær hos myndigheder, forskere og forbrugere. den videnskabe- lige komité for fødevarer angiver, at l-selenomethionin-indholdet i selengær varierer mellem 20 og 50%. (european commission, scientific committee and food, opinion on substances for nutritional purposes which have been proposed for use in the manufacture of foods for particular nutritional purposes (”parnuts”), 12. maj 1999, side 5. scientific committee on food on the tolerable upper intake level of seleni- um, 11. oktober 2000, side 2). til anvendelse i kosttilskud eller lægemidler er det vig- tigt, at de væsentlige forbindelser af selen (specier) forekommer i ensartet koncentra- tion. dette muliggør langtidsstudier af betydningen af selen, hvor reproducerbarhe- den fra produktion til produktion er af afgørende betydning for tolkning og anven- delse af resultater fra studierne. selengær som handelsvare fremstilles almindeligvis ved dyrkning på melasse, som har varierende sammensætning. det er kendt fra litteraturen, at forskellige typer af selengær giver anledning til varierende optagelighed og dermed afvigende respons (clausen, j. m.fl., a comparison of ten selenium supplementation products, selenium in medicine and biology, walter de gruyter & co 305 - 14
(1988)). en række patenter beskriver dyrkning af selengær med forskellig koncentration af selen. således beskri- ver us patent 4.530.846 [bilag h/q] en fremgangsmåde til fremstilling af et selengær- produkt med et selenindhold på mindst 1000 ppm, hovedsageligt i form af organisk intracellulært bundet selen. gæren dyrkes under aerobe forhold med kontinuerlig, stigende tilledning af medium med et lavt indhold af uorganisk svovl. vandopløse- ligt selensalt tilsættes ligeledes kontinuerligt. som eksempler på anvendt gær og car- bonkilde nævnes saccharomyces spp og melasse. patentet angiver imidlertid ikke, hvorledes selen er bundet i gæren, eller i hvilket omfang fremgangsmåden kan re- produceres. ved fremgangsmåden ifølge den foreliggende opfindelse opnås et se- lengærprodukt med højt selenindhold, 1000-1600 ppm, og hvori indholdet af l- selenomethionin konstant udgør mindst 55 % og indholdet af uorganiske selenfor- bindelser højst udgør 1 % af det samlede selenindhold. opnåelsen af dette produkt er desuden meget reproducerbar. patentansøgning wo98/37172 [ikke fremlagt] omhandler ligeledes dyrkning og an- vendelse af selengær. fremgangsmåden ved dyrkning indebærer opblanding af et vandopløseligt salt af selen med et næringsmedium. hvorefter dette tilføres en van- dig opslæmning af gær. den fremkomne selengær har et indhold af selen, der ikke opdeles i konstante, entydige forbindelser. mulighed for at opnå ensartet udbytte og sammensætning af selenforbindelser er heller ikke beskrevet. - 15 - det er kendt, at gær og andre mikroorganismer kan dyrkes på et medium, som inde- holder et mindstemål af næringsstoffer, et såkaldt minimalmedium. imidlertid an- vendes denne fremgangsmåde ikke i almindelighed industrielt, fordi den kan være forbundet med ringe udbytte og uønsket sammensætning af mikroorganismerne. det er derfor overraskende, at man ved dyrkning på et minimalmedium i overensstem- melse med denne opfindelse kan opnå et godt udbytte og en reproducerbar sammen- sætning af selengær, som er optimal i menneskets ernæring. nærværende opfindelse angår således en fremgangsmåde til fremstilling af et gær- produkt, som indeholder betydelige og ensartede mængder af fordøjeligt, organisk bundet selen. den frembragte gær er et pulver, der kan anvendes direkte eller på sædvanlig måde presses til tabletter. disse kan markedsføres som fødevare, kosttil- skud eller lægemiddel.” det danske stridspatent indeholder herudover følgende beskrivelse af opfindelsen: ”kort beskrivelse af opfindelsen: opfindelsen angår derfor i et første aspekt en fremgangsmåde til fremstilling af et se- lengærprodukt til brug i fødevarer, kosttilskud eller lægemidler, hvorved gæren dyr- kes på et minimalmedium under aerobe forhold, hvilken fremgangsmåde er ejen- dommelig ved trinnene:
  1. a)dyrkning af gæren, hvilket omfatter:
  2. i)at næringsstoffer tilledes gæren under dyrkningen i et omfang, som svarer til omsætningen af disse næringsstoffer i gæren;
  3. ii)at glucose og/eller maltose er eneste kilder til carbon i tilløbsmediet; iii) at koncentrationen af ethanol under dyrkningen ikke overstiger 1%, foretrukket 0,5%, og mest foretrukket 0,2%;
  4. iv)at ph under dyrkningen opretholdes mellem 4,0 og 6,0, foretrukket mellem 4,4 og 5,7, mest foretrukket mellem 4,7 og 5,4, såsom 5,0;
  5. v)at tilløbsmediet iblandes et vandopløseligt salt af selen i en mængde svarende til mellem 1.000 og 1.500 ppm selen, beregnet på tørstof i gæren,
  6. b)isolering af gæren opnået fra trin a). det fremkomne produkt er tillige karakteriseret ved en human absorption på mere end 85%. i et andet aspekt angår opfindelsen et selengærprodukt til brug i fødevarer, kosttil- skud eller lægemidler, som er ejendommeligt ved, - 16 -
  7. a)et indhold af organiske selenforbindelser svarende til mellem 1.000 og 1.600 ppm selen, fortrinsvis mellem 1.100 ppm og 1.500 ppm selen, mest fortrins- vis mellem 1.200 ppm og 1.400 ppm selen,
  8. b)at indholdet af l-selenomethionin konstant udgør mindst 55% af det samle- de indhold af selen, at indholdet af selen i uorganiske selenforbindelser ud- gør højst 1 % af det samlede indhold af selen,
  9. c)at selengærproduktet er opnåeligt ved dyrkning af en gærkultur og isolering af gæren opnået ved dyrkningen, hvilken dyrkning omfatter
  10. i)at næringsstoffer tilledes gæren under dyrkningen i et omfang, som svarer til omsætningen af disse næringsstoffer i gæren;
  11. ii)at glucose og/eller maltose er eneste kilder til carbon i tilløbsmediet; iii) at koncentrationen af ethanol under dyrkningen ikke overstiger 1%, foretrukket 0,5%, og mest foretrukket 0,2%;
  12. iv)at ph under dyrkningen opretholdes mellem 4,0 – 6,0, foretrukket mellem 4,4 – 5,7, mest foretrukket mellem 4,7 – 5,4, såsom 5,0; og
  13. v)at tilløbsmediet iblandes et vandopløseligt salt af selen i en mængde svarende til mellem 1.000 og 1.500 ppm selen, beregnet på tørstof i gæren. i et tredje aspekt angår opfindelsen anvendelse af selengærproduktet ifølge opfindel- sen til fremstilling af en fødevare, et kosttilskud eller et lægemiddel. detaljeret beskrivelse af opfindelsen: før den detaljerede gennemgang af opfindelsens forskellige udførelsesformer skal en række specifikke for opfindelsens hovedaspekter relevante betegnelser defineres. definitioner minimalmedium: medium, der indeholder den mindste mængde af næringsstoffer, som er nødvendig for at opnå vækst af gær. farmaceutisk kvalitet: egenskaber ved produkter, som er beskrevet i en national farmakopé. startmedium: blanding af vand og øvrige næringsstoffer, der podes med gær. tilløbsmedium: næringsstoffer, der tilføres startmedium/kulturen efter påsætning af gær. zak-metoden: fremgangsmåde til dyrkning af gær, hvorved denne påsættes et startmedium, hvorefter der under aerobe forhold tilføres næringsstoffer via et til- løbsmedium. tilførsel af næringsstoffer sker under aerobe forhold med en hastighed, der svarer til optagelsen af disse næringsstoffer i gær. herved dannes der ved korrekt - 17 - styring kun lidt alkohol. den dannede alkohol omsættes af gæren i den sidste del af dyrkningen. metoden er klassisk og betegnes z-metoden. den er som princip udvik- let af søren sak og beskrevet i dansk patent nr. 28507
(1921). human absorption: forskel mellem indtaget mængde isotop og udskilt mængde iso- top i afføring. human absorption beregnes i procent af den indtagne mængde isotop. de hidtil kendte metoder til fremstilling af selengærprodukter benytter som omtalt tidligere hovedsageligt melasse som carbonkilde, og der hvor der er benyttet et glu- cosebaseret medium, wo98/37172, afviger denne metode fra metoden ifølge opfin- delsen, idet der ikke til stadighed sikres en tilførsel af næringsstoffer og selen, der svarer til cellevæksten. endvidere sker iblanding af selen over et forholdsvis kort tidsrum, hvilket vanskeliggør dannelse af organiske forbindelser af selen, der har særlig betydning i menneskets ernæring næringsstoffer til dyrkning af gær ifølge opfindelsen omfatter kilder til carbon og ni- trogen samt mikronæringsstoffer i form af vitaminer og mineraler. carbon skal være i en form, der umiddelbart kan optages under dyrkningen. det må derfor være letop- løseligt i vand og have en sammensætning, der muliggør omsætning ved hjælp af de enzymer, som findes i gæren. hertil kan regnes glucose og maltose, som kan opren- ses til glucosesirup på en sådan måde, at de kan anvendes som næringsstof for mi- kroorganismer, der producerer fødevarer, kosttilskud eller lægemidler. som kilde til nitrogen er det muligt at gøre brug af uorganiske forbindelser, herunder ammoniak. denne må have en sådan renhed, at der ikke forekommer toksicitet eller dannelse af uønskede forbindelser. gærens stofskifte er ikke fuldstændig kendt, hvorfor det er nødvendigt at tilføre mikronæringsstoffer i form af gærekstrakt, som er beskrevet i farmakopé. gær ifølge opfindelsen kan således fremstilles på grundlag af råvarer i farmaceutisk kvalitet, der sammensættes på en sådan nåde, at gæren har et mindstemål af næ- ringsstoffer til rådighed for vækst. en typisk fremgangsmåde ved dyrkning af gæren vil omfatte nedenstående trin: 1) tilvirkning af næringsmedium 2) podning med påsætningsgær 3) dyrkning 4) høst 5) vask 6) varmebehandling 7) tørring tilvirkning af næringsmedium sker ved opløsning af sukkerstoffer, vitaminer og mi- neraler i vand, der opvarmes til mellem 24 og 37°c, fortrinsvis mellem 26 og 34°c, og bedst mellem 28 og 32°c inden påsætning af gær. podning med påsætningsgær sker til det færdige og opvarmede næringsmedium, idet gærcellerne opslemmes i mediet under omrøring med en frekvens på mellem 1 og 2 hz. selengær kan fremstilles ved brug af en række arter, herunder saccharomyces cerevisiae, saccharomyces boulardii sequela og saccharomyces torula. blandt disse er sac- charomyces cerevisiae generelt at betragte som en art, der er velegnet til menneskelig indtagelse, og den har en udbredt anvendelse til fremstilling af brød og alkohol. til - 18 - fremstilling af et selengærprodukt ifølge opfindelsen er det en fordel at benytte en produktionsstamme, som er genetisk stabil og derved mindre tilbøjelig til at undergå mutation. i en udførelsesform ifølge den foreliggende opfindelse benyttes således stammen atoc nr. 74.366, uden at opfindelsen dog er begrænset hertil. dyrkning finder sted på grundlag af næringsmedium, der tilvirkes som et særligt minimalmedium og podes med den ovenfor beskrevne påsætningsgær. endvidere tilføres yderligere carbonhydrater i form af glucose og/eller maltose. som kilde til ni- trogen iblandes en vandig opløsning af ammoniak. for at sikre størst mulig vækst og modvirke dannelse af alkohol tilledes store mængder luft, fortrinsvis atmosfærisk luft, der indeholder tilstrækkeligt oxygen. ved fremstilling i stor målestok er det i praksis vanskeligt at opnå en fuldstændig oxydering. dette kan ændre gærens næ- ringsbehov en smule. standsning af dyrkningen sker ved en koncentration af gær på ca. 4 % w/w, beregnet på det samlede indhold af næringsmedium og gær. tilførsel af næringsstoffer sker under aerobe forhold med en hastighed, der svarer til optagelsen af disse næringsstoffer i gær. herved dannes der ved korrekt styring kun lidt alkohol. den dannede alkohol omsættes af gæren i den sidste del af dyrkningen. i praksis styres tilledningen af næringsstoffer i den rette mængde ved løbende at må- le den mængde alkohol i form af ethanol, som dannes under væksten. hvis tillednin- gen af næringsstoffer sker for langsomt vil der ikke dannes alkohol, og hvis tillednin- gen sker for hurtigt, vil der dannes betydelige mængder af alkohol. den til enhver tid tilstedeværende mængde af alkohol bør derfor ikke overstige 1 %, foretrukket 0,5 %, og mest foretrukket 0,2 %. endvidere kan ph af vækstmediet benyttes som en indika- tor for opretholdelsen af den rette balance mellem forbrug og tilledning af nærings- stoffer, og ph kontrolleres og reguleres derfor under væksten således, at denne hol- des mellem 4,0 og 6,0. foretrukket mellem 4,4 og 5,7, mest foretrukket mellem 4,7 og 5,4, såsom 5,0. høst indebærer adskillelse af den dyrkede gær fra næringsmediet. dette sker bedst ved centrifugering, hvorved der fremkommer en koncentreret gærflade, som inde- holder ca. 20% gær w/w. vask har til formål at fjerne overskydende næringsstoffer i gærfløden. den foregår mest hensigtsmæssigt ved tilledning af vand, hvorefter der foretages centrifugering, således at der fremkommer gærfløde. på denne måde vaskes gæren 2 til 6 gange og fortrinsvis 4 gange, hvorved praktisk taget alle ekstracellulære næringsstoffer fjernes fra gærfløden. varmebehandling gennemføres med henblik på at dræbe gærcellerne, således at den heri forekommende selen bliver tilgængelig ved menneskets fordøjelse. varmebe- handling medfører tillige en vidtgående sprængning af gærcellerne. en hensigtsmæs- sig varmebehandling kan gennemføres som pasteurisering i pladevarmeveksler ved en temperatur på 87°c og en holdetid på 30 sek. tørring af gæren kan ske ved almindelige fremgangsmåder til tørring af organisk materiale, herunder frysetørring, tromletørring, bakketørring eller forstøvningstør- ring, fortrinsvis forstøvningstørring. ved forstøvningstørring sker fjernelse af vand ved en indgangstemperatur for luft på mellem 160 og 240°c, fortrinsvis mellem 180 og 220°c og bedst omkring 200°c. udgangstemperaturen kan i sammenhæng her- med være fra 70 til 90°c, fortrinsvis 80 til 90°c og bedst omkring 86°c. det frem- - 19 - komne pulver har et indhold af vand på mellem 4 og 9 %, fortrinsvis mellem 6 og 9 % og bedst omkring 8 %. pulveret kan efterfølgende behandles ved befugtning med vand og efterfølgende tørring, hvorved evnen til senere at optage vand forbedres. selengær ifølge opfindelsen kan anvendes til fremstilling af fødevarer, kosttilskud el- ler lægemidler, enten som eneste kilde til selen eller i kombination med andre selen- holdige ingredienser. opfindelsen angår derfor også en fødevare, et kosttilskud eller et lægemiddel, der som kilde til selen anvender selengær ifølge opfindelsen. i en udførelsesform for opfindelsen omfatter anvendelsen et produkt, der indeholder sprængemiddel, flydemiddel samt selengær. denne blanding trykkes til en tablet med et indhold på mellem 25 og 800 µg selen, særligt mellem 40 og 300 µg selen og især 50 til 200 µg selen per tablet. opfindelsen vil ud over det her beskrevne anvendelsesområde dog også kunne an- vendes til andre typer fødevarer, der ønskes beriget med selen, såsom mel, andre pulverformige fødevarer samt drikkevarer. opfindelsen belyses nærmere ved hjælp af de efterfølgende eksempler. eksempler eksempel 1 1
  1. a)i dette eksempel anvendes en fermentor med et rumfang på 0,0014 m3. der fremstilles et næringsmedium med følgende sammensætning af råvarer i farma- ceutisk kvalitet ved begyndelsen af dyrkningen: vand ph.eur. 5.400 g glucosesirup ph.eur. 31,8 g kh2po4 ph.eur. 25 g ammoniakvand 2,5 % ph.eur. 114 g biotin (0,01 %) ph.eur. 2,l ml thiaminhydrochlorid (1,0 %) ph.eur. 2,5 ml calciumpantothenat ph.eur. 0,08 g gærekstrakt usp 75 g jernsulfat ph.eur. 0,10 g magnesiumsulfat ph.eur. 5,0 g mangansulfat ph.eur. 0,033 g zinksulfat ph.eur. 0,033 g betegnelsen ”ph.eur.” angiver, at de benyttede råvarer opfylder forskrifterne for renhed og sammensætning af råvarer til fremstilling af lægemidler som beskrevet i den europæiske farmakopé. ”usp” angiver det tilsvarende indhold ifølge us- farmakopé. - 20 - efter indstilling af temperaturen til 30°c iblandes 5 g påsætningsgær. det podede næringsmedium gennemblæses med steril atmosfærisk luft i en mængde på 20 liter pr. min. omrøring foregår med spindel med en frekvens på 17 hz. til regulering af ph anvendes svovlsyre, således at ph holdes mellem 4,7 og 5,4. det kontrolleres, at ethanol ikke overstiger 0,2 %, og koncentrationen af ethanol holdes i øvrigt så tæt ved 0 som muligt. under dyrkningen iblandes næringsstoffer i tilløbet i følgende mængde: glucosesirup ph.eur. 1.006,5 g ammoniakvand 2,5% ph.eur. 1.451 g endvidere iblandes natriumselenit i ammoniakvand 2,5 %, således: natriumselenit ph.eur. 1,2758 g tilledning af glucosesirup, ammoniakvand og natriumselenit sker med en hastighed, der svarer til omsætning af stofferne i gæren. dette kontrolleres ved til stadighed at måle dannelse af alkohol. koncentration af alkohol holdes tæt på 0. tilførsel af ammoniakvand (25 %) standses efter 18 timer. efter 19 timer standses dyrkningen. høst af gæren sker ved at overføre mediet med gæren til en centrifuge. her adskilles gærfløde fra overskydende medium i løbet af 5 min. den således fremkomne gærflø- de med et indhold af tørstof på ca. 20 % iblandes 5.000 g vand. herefter centrifugeres gærblandingen igen. vaskevand bortskaffes og den fremkomne gærfløde iblandes 5.000 g vand. processen gentages 4 gange far at adskille gærceller fra medium. den vaskede gærfløde føres gennem en pladepasteur, hvor den udsættes for en var- mebehandling ved 87°c med en holdetid på 30 sek. umiddelbart efter varmebehand- ling afkøles gærfløden til 4°c i en pladepasteur. mængden af gærfløde er 1.897,5 g. gærfløden overføres til en frysetørrer. efter indfrysning ved -40°c i 24 timer subli- merer vandet i løbet af 18 timer. der fremkommer herved 380 g tørret selengær med et vandindhold på 0,2 % og en koncentration af selen på 1.380 ppm i tørstof. ernæ- ringsmæssige egenskaber og reproducerbarhed af det således fremstillede selengær- produkt fastsættes således som beskrevet nedenfor i eksempel 2, 4 og 5. 1
  2. b)gær fremstilles i overensstemmelse med eksempel 1ovenfor, men der anvendes en fermentor med et rumfang på 150 m3. næringsmediet sammensættes af tilsvarende bestanddele i det samme indbyrdes forhold og har en samlet vægt på 56.848 kg. tilledning sker i form af glucosesirup og ammoniakvand 2,5 % på samme måde som i eksempel 1 a. der medgår hertil 13.500 kg glucosesirup og 1.410,5 kg ammoniak- vand 25 %. selen i form af natriumselenit iblandes i en mængde på 15 kg. tillednin- gen af ammoniakvand standses efter 18 timer, og dyrkningen standses efter 19 timer. - 21 - vask og varmebehandling af gæren foregår efter principper som beskrevet i eksem- pel l a. tørring af gæren sker ved forstøvningstørring i tørretårn med roterende forstøver- hjul. frekvens af forstøverhjul sættes til 167 hz. temperatur af luft til tørring indstil- les til 200°c. der fremkommer en udgangstemperatur på 86°c. den samlede mæng- de pulver med et vandindhold på 7 % udgør 5.035 kg. koncentration af selen er 1.355 ppm på tørstof. ernæringsmæssige egenskaber og reproducerbarhed af det således fremstillede selengærprodukt fastsættes således som beskrevet nedenfor i eksempel 2, 4 og 5. eksempel 2 fordøjelighed og absorption af selengær 2
  3. a)in vitro fordøjelighed af selen som grundlag for bestemmelse af in vitro fordøjelighed af selengær anvendes en vi- dereudvikling af plantedirektoratets metode 9.1 af 15. november 1994 til bestemmelse af enzymfordøjeligt organisk stof hos svin (efos svin). fremgangsmåden er ændret, således at den svarer til forholdene i menneskets fordøjelse. enzymer, der kan ned- bryde cellulose, indgår således ikke i denne in vitro undersøgelse. princippet er behandling med pepsin, efterfulgt af påvirkning med pancreatin. uop- løst prøvemateriale filtreres fra og tørres. ved at sammenholde bestemmelser af selen i den oprindelige prøve med indhold i filtrat og retentat beregnes fordøjeligheden af selen. således blandes selengær ved ph 2,0 med pepsin og inkuberes ved 40°c i 75 min. ef- terfulgt af behandling med pancreatin ved ph 6,8 ved 40°c 3 timer og 30 min. heref- ter tilføres ved brug af vakuum, og indhold af selen i henholdsvis filtrat og retentat bestemmes. indhold af selen i filtratet i procent af samlet indhold af selen i prøven er udtryk for in vitro fordøjelighed af selengæren. der opnås en selengær med følgende karakteristika: fordøjeligt selen: 99%. 2
  4. b)in vivo absorption og retention af selen som grundlag for bestemmelse af in vivo fordøjelighed indgives selengær ifølge op- findelsen, hvor der til dyrkning er anvendt en stabil isotop med et indhold af selen-77 på 99,3 %. da naturligt forekommende selen kun indeholder 7,8 % se-77 og samtidigt indeholder 49,82% se-80, er det muligt ved måling af disse isotoper via icp-ms (in- ductively coupled plasma – mass speectrometry) at bestemme andelen i humant ma- leriale, der stammer fra en sådan tilførsel af isotop. bestemmelse af in vivo absorption, retention og biotilgængelighed sker i øvrigt som følger: - 22 - til 12 mandlige deltagere i alderen fra 20 til 55 år indgives en engangsdosis selengær svarende til 300 µg selen-77. deltagerne opsamler i en periode på 5 dage faeces og urin, og der tages i perioden 11 blodprøver. til kontrol for opsamling af faeces og urin indgives henholdsvis paba (para-amino-benzoic-acid) og plastrør, der kan gen- findes dels i urin og dels i faeces som kontrol på opsamlingen. den absorberede mængde selen-77 bestemmes ved at sammenholde indtagelse af selen-77 med udskil- lelse gennem faeces. retentionen (den tilbageholdte mængde) bestemmes som indgivet tracermængde minus udskillelse via faeces og urin i forhold til den indgivne tracermængde. blod- prøverne anvendes til at beskrive pharmakodynamikken. der opnås følgende karakteristika for absorption og retention af selengæren ifølge opfindelsen: absorptionen er 89%. retentionen er 74%. 2
  5. c)in vivo dosis/respons ved langtidsindtagelse en gruppe på 49 personer indtog blindet i en sammenhængende periode på 2 år dag- ligt en tablet med indhold af 0, 100, 200 eller 300 µg selen i form af selengær efter op- findelsen. endvidere indtog deltagerne gennem føden den mængde at selen, som findes naturligt i kosten (ca. 50 µg/dag). efter 2 års forløb, hvor ligevægt mellem op- tagelse og udskillelse er opnået, blev indhold af selen i helblod bestemt. følgende resultater blev opgjort: indtag pr. dag antal deltagere middelværdi af optagelse af se- stigning i for- (µg) selen i helblod len pr. µg (µg/l/ hold til placebo (µg/
  6. l)µg) (%) 0 17 95,6 - 0 100 11 177,2 0,816 85 200 8 307,6 1,06 222 300 13 440,8 1,15 361 på grundlag af ovenstående udfald kunne en lineær sammenhæng mellem indtaget dosis af selengær og indhold af selen i helblod fastslås og udtrykkes på følgende må- de: selen i helblod (µg/
  7. l)= 1,12 x indtag (µg/dag) + 38 den fundne respons på selengær ifølge opfindelsen overgår, hvad der tidligere er be- skrevet for gærselen. (schrauzer, g.n., selenium in human nutrition, bioinorganic chemistry, 8:303-318
(1978)). 2
  1. d)måling af bivirkninger ved langtidsindtagelse selengær ifølge opfindelsen i doser på 100, 200 eller 300 µg eller placebo blev i en pe- riode på 1 - 2½ år givet til 806 personer i 4 ligeligt fordelte grupper. perioden omfat- ter ca. 1400 personår. i denne periode blev der undersøgt for tolerance og bivirknin- ger hos samtlige personer. 2,6 % (21 af de 806 personer) rapporterede bivirkninger. - 23 - før randomiseringen blev brudt, blev bivirkningerne katagoriseret som enten milde (17 personer), moderate (4 personer) eller alvorlige (0 personer). efter brydning af randomiseringen viste bivirkningerne sig at fordele sig tilfældigt på grupperne, idet 8 relaterede sig til placebo, 8 til 200 µg se og 6 til 300 µg se. det kon- kluderes, at bivirkningerne var insignifikante og ikke relaterede sig til selengær ifølge opfindelsen. eksempel 3 tablet: fremstilling af tablet af selengær ifølge opfindelsen sker ved anvendelse af følgende ingredienser: selengær efter opfindelsen tablethjælpestoffer: mikrokrystallinsk cellulose siliciumdioxid magnesiumsalte af fedtsyrer flydemiddel: dicalciumphosphat overfladebehandlingsmiddel: hydroxypropylmethylcellulose talkum farvestof: titandioxid ingredienserne blandes på sædvanlig måde og presses til tabletter, således at hver tablet indeholder 100 µg selen hidrørende fra selengær. eksempel 4 speciering af selengær en selengær dyrket på traditionel måde ved brug af melasse samt 2 batch selengær ifølge opfindelsen blev undersøgt for indhold af forskellige forbindelser af selen. prøverne blev i oxygenfrie omgivelser underkastet syrehydrolyse med thioglycolsyre som stabilisator. indhold af selenomethionin og natriumselenit blev herefter bestemt ved hplc mod laboratoriereferencer. selengær dyrket på melasse havde et indhold på 49 % selenomethionin af den eks- traherbare og hplc-tilgængelige del, medens selengær ifølge opfindelsen ved to uafhængige produktions-batch viste et indhold på henholdsvis 72,8 og 72,9 % sele- nomethionin af den ekstraherbare og hplc-tilgængelige del. den ekstraherbare del af totalselen findes som 95 - 101 %. heraf kan ca. 80 % under- søges ved brug af hplc. den mindste sande mængde af l-selenomethionin af totalse- len er således 72,8 % x 95 % x 80 % = 55,3 %. den højeste mulige sande mængde er ca. 90 %. den målte mængde af natriumselenit er mindre end 1 %. til bestemmelse af specier af selen kan anvendes fremgangsmåde beskrevet af erik h. larsen m.fl. (lar- sen, e.h. m.fl., j. anal. at spectrom., 16, 1403-1408, 2000). - 24 - eksempel 5 in vivo absorption af selengær og uorganisk selen på samme måde som i anvendelseseksempel 2 b blev der indgivet enten selengær ifølge opfindelsen eller uorganisk selen-77 til de samme 12 forsøgspersoner. human absorption af de to kilder til selen var henholdsvis 89 % for selengær ifølge opfindel- sen og 23 % for uorganisk selen.” den danske patentansøgning og behandlingen heraf ved patent- og varemærkestyrelsen det danske stridspatent er udstedt på baggrund af en patentansøgning indleveret af pharma nord til patent- og varemærkestyrelsen den 15. marts 2002. den danske patentansøgning indeholdt følgende patentkrav: ”… 1. selengærprodukt til brug i fødevarer, kosttilskud eller lægemidler k e n d e t e g n - e t ved et indhold af organiske selenforbindelser på mellem 1.000 og 1.600 ppm, for- trinsvis mellem 1.100 ppm og 1.500 ppm, mest fortrinsvis mellem 1.200 ppm og 1.400 ppm, at indholdet af l-selenomethionin konstant udgør mindst 55 % af det samlede indhold af selen, og at indholdet af uorganiske selenforbindelser udgør højst 1 % af det samlede indhold af selen. 2. fremgangsmåde til fremstilling af et selengærprodukt til brug i fødevarer, kosttil- skud eller lægemidler, hvorved gæren dyrkes på et minimalmedium under aerobe forhold, k e n d e t e g n e t ved
  2. i)at næringsstoffer tilledes gæren under dyrkningen i et omfang, som svarer til omsætningen af disse næringsstoffer og selen i gæren;
  3. ii)at glucose og/eller maltose er de eneste kilder til carbon i tilløbsmediet; iii) at koncentrationen af ethanol under dyrkningen ikke overstiger 1 %, fore- trukket 0,5 %, og mest foretrukket 0,2 %;
  4. iv)at ph under dyrkningen opretholdes mellem 4,0 og 6,0, foretrukket mellem 4,4 og 5,7, mest foretrukket mellem 4,7 og 5,4, såsom 5,0; og
  5. v)at tilløbsmediet iblandes et vandopløseligt salt af selen i en mængde svaren- de til mellem 1.000 og 1.500 ppm, beregnet på tørstof i gæren, 3. fremgangsmåde ifølge krav 2, k e n d e t e g n e t ved, at minimalmediet er sam- mensat af råvarer af farmaceutisk kvalitet. - 25 - 4. fremgangsmåde ifølge et hvilket som helst af kravene 2 - 3, k e n d e t e g n e t ved, at gæren omfatter en art tilhørende slægten saccharomycetaceae, fortrinsvis saccharo- myces cerevisiae, saccharomyces boulardii sequela og/eller saccharomyces torula. 5. fremgangsmåde ifølge krav 4, k e n d e t e g n e t ved, at gæren er saccharomyces ce- revisiae. 6. selengærprodukt ifølge krav 1, fremstillet ved fremgangsmåden ifølge krav 2 - 5. 7. fødevare k e n d e t e g n e t ved, at den omfatter et selengærprodukt ifølge krav 6. 8. kosttilskud k e n d e t e g n e t ved, at den omfatter et selengærprodukt ifølge krav 6. 9. lægemiddel k e n d e t e g n e t ved, at den omfatter et selengærprodukt ifølge krav 6. 10. anvendelse af selengærprodukt ifølge krav 6, til fremstilling af en fødevare. 11. anvendelse af selengærprodukt ifølge krav 6, til fremstilling af et kosttilskud. 12. anvendelse af selengærprodukt ifølge krav 6, til fremstilling af et lægemiddel. …” patentkravene i den danske patentansøgning afviger delvist fra kravene i det senere udstedte danske stridspatent (sammenlign ovenfor dommens s. 11-13). beskrivelsen i den danske patentansøgning svarer i vidt omfang til beskrivelsen i det senere udstedte danske stridspatent, idet patentansøgningen dog indeholder bl.a. en anderledes be- skrivelse af us-patent 4.530.846 (bilag h/
  6. q)(sammenlign ovenfor dommens s. 14): ”… således beskriver us patent 4.530.846 dyrkning af selengær med omkring 1.000 ppm selen. patentet angiver imidlertid ikke, hvorledes selen er bundet i gæren, eller i hvilket omfang fremgangsmåden kan reproduceres. …” patentansøgningen indeholder i forhold til det danske stridspatent endvidere en ændret ”kort beskrivelsen af opfindelsen”, som afspejler de anderledes krav i patentan- søgningen. beskrivelsen i ansøgningen indeholder således bl.a. følgende sætning, som ikke er medtaget i beskrivelsen i stridspatentet: - 26 - ”… opfindelsen angår derfor i et første aspekt et selengærprodukt til brug i fødevarer, kosttilskud eller lægemidler, som er ejendommeligt ved et indhold af organiske se- lenforbindelser på mellem 1.000 og 1.600 ppm, fortrinsvis mellem 1.100 ppm og 1.500 ppm, mest fortrinsvis mellem 1.200 ppm og 1.400 ppm, at indholdet af l-seleno- methionin konstant udgør mindst 55 % af det samlede indhold af selen, og at indhol- det af uorganiske selenforbindelser udgør højst 1 % af det samlede indhold af selen. …” ved brev af 29. oktober 2002 skrev patent- og varemærkestyrelsen til pharma nords patent- agent, chas. hude, efter styrelsens 1. behandling af patentansøgningen. styrelsen anførte i den forbindelse, at ansøgningen efter styrelsens opfattelse indeholdt en patenterbar opfin- delse, men at ansøgningen dog ikke kunne godkendes i sin nuværende form, dels fordi an- søgningen angik uafhængige opfindelser, og dels fordi en del af opfindelsen ikke var til- strækkelig tydeligt beskrevet. af patent- og varemærkestyrelsens brev fremgår nærmere herom bl.a.: ”… 2. som kravene er omfattet angår ansøgningen flere uafhængige opfindelser, nemlig: - selengærprodukt (krav 1, 6), en fremgangsmåde til fremstilling heraf (krav 2-5), samt anvendelse af produktet (krav 10-12), - fødevare, som omfatter et selengærprodukt ifølge krav 6 (krav 7), - kosttilskud, som omfatter et selengærprodukt ifølge krav 6 (krav 8), og - lægemiddel, som omfatter et selengærprodukt ifølge krav 6 (krav 9). opfindelserne i kravene 7-9 angår indbyrdes uafhængige opfindelser, nemlig tre for- skellige produkter indeholdende selengærprodukt. opfindelserne beskrevet i krave- ne 7-9 er endvidere uafhængige af fremgangsmåden til fremstilling af selengærpro- duktet beskrevet i krav 2. vi har nyhedsundersøgt og behandlet opfindelsen beskrevet i kravene 1-6 og krav 10- 12. 3. vi mener, at den nærmeste liggende kendte teknik er beskrevet i us 4530846 [bilag h/q]. skriftet omhandler en fremgangsmåde til fremstilling af et selengærprodukt med et selenindhold på mindst 1000 ppm. i produktet findes selen hovedsagelig som orga- nisk, intracellulært bundet selen i modsætning til uorganisk, extracellulært selen. ifølge fremgangsmåden dyrkes gær under aerobe forhold med en kontinuerlig og - 27 - stigende tilledning af medium med et lavt indhold af uorganisk svovl. samtidig til- sættes kontinuerligt et vandopløseligt selensalt. efter vækst høstes cellerne, som va- skes, pasteuriseres og tørres for at opnå det færdige produkt. den anvendte gær kan være saccharomyces spp. kulstofkilden i mediet kan være melasse. det fremgår ikke af skriftet, hvorledes selen er bundet i gæren, men det er kendt, f.eks. fra journal of applied microbiology, vol. 92
(2002), side 602-610, at selen i gær findes som seleno- methionin. det et endvidere kendt herfra, at selengærprodukter skal have et højt indhold af selenomethionin og et lavt indhold af uorganisk selen. ydermere er det også kendt at anvende stammen saccharomyces boulardii sequela atcc 74366 til frem- stilling af selengær (se us20010043925 og wo 98/37172). 4. deres krav 1 angår et selengærprodukt, som er kendetegnet ved et organisk selen- indhold på mellem 1000 og 1600 ppm, samt at indholdet af l-selenomethionin kon- stant udgør mindst 55 % og uorganiske selenforbindelser udgør højst 1 % af det sam- lede indhold af selen. vi mener, at deres selengærprodukt adskiller sig fra de kendte produkter ved præ- cist at indeholde mindst 55 % l-selenomethionin. kravet, der er ønskeagtigt affattet, indeholder ikke samtlige tekniske midler, som er nødvendige for at beskrive se- lengærproduktet ifølge opfindelsen. kravet må derfor præciseres ved yderligere at være fremstillet ved fremgangsmåden ifølge kravene 2-5. 5. krav 6 angår et selengærprodukt ifølge krav 1 fremstillet ved fremgangsmåden ifølge krav 2-5. ved præcisering af krav 1, angår krav 6 det samme som krav 1, og må derfor udgå. 6. deres krav 2-5 omhandler en fremgangsmåde til fremstilling af et selengærpro- dukt. en lignende fremgangsmåde er ikke beskrevet i ovennævnte kendte teknik, og krav 2-5 angår derfor en patenterbar opfindelse. kravene må dog præciseres, idet fremgangsmåden angår fremstilling af et selengærprodukt, men kun er karakteriseret ved dyrkning af gæren. de må derfor angive yderligere trin for isolering af gærpro- duktet, se eksempelvis beskrivelsen side 6, linie 2 1-27. 7. krav 10-12, som omhandler anvendelse af selengærproduktet i en fødevare, i et kosttilskud eller i et lægemiddel, er ligeledes patenterbare. …” den 29. april 2003 fremsendte chas. hude et revideret kravsæt til patent- og varemærkesty- relsen. i følgebrevet anføres om kravene bl.a.: ”… krav 7-9 i det oprindelige kravsæt er nu udgået. fremgangsmåden i krav 1 (oprindeligt krav 2) er nu præciseret, som ønsket af styrel- sen, ved angivelse af yderligere trin, som beskriver isoleringen af gærproduktet. dis- se yderligere trin er endvidere præciseret i krav 2 og 3. basis for disse ændringer fin- des i beskrivelsen side 6 linje 21-27. - 28 - krav 4-6 svarer til de oprindelige krav 3-5. krav 7, som angår et selengærprodukt, indeholder, udover ordlyden ad det oprinde- lige krav 1, endvidere under punkt
  1. c)en præcisering af, hvilke vækstbetingelser, som skal være opfyldt for at opnå det ønskede produkt. dels ved angivelse af gærtypen og dels ved angivelse af de essentielle vækstbetingelser, hvorunder gæren skal dyr- kes, samt i hvilken type medium. basis for punkt
  2. c)kan findes dels i oprindeligt krav 4 og dels side 7 linje 14-16 og 22-25. i krav 8 er de tekniske midler yderligere præciseret ved henvisning til fremgangsmå- den ifølge krav 1-6. krav 9-11 svarer til de oprindelige krav 10-12. …” det reviderede kravsæt var som følger: ”… 1. fremgangsmåde til fremstilling af et selengærprodukt til brug i fødevarer, kosttilskud eller lægemidler, hvorved gæren dyrkes på et minimalmedium under ae- robe forhold, kendetegnet ved, trinene:
  3. a)dyrkning af gæren, hvilket omfatter
  4. i)at næringsstoffer tilledes gæren under dyrkningen i et omfang, som svarer til omsætningen af disse næringsstoffer i gæren;
  5. ii)at glucose og/eller maltose er de eneste kilder til carbon i tilløbsmedi- et; iii) at koncentrationen af ethanol under dyrkningen ikke overstiger 1 %, foretrukket 0,5 %, og mest foretrukket 0,2 %;
  6. iv)at ph under dyrkningen opretholdes mellem 4,0 – 6,0, foretrukket mellem 4,4 – 5,7, mest foretrukket mellem 4,7 – 5,4, såsom 5,0; og
  7. v)at tilløbsmediet iblandes et vandopløseligt salt af selen i en mængde svarende til mellem 1.000 og 1.500 ppm selen, beregnet på tørstof i gæren,
  8. b)isolering af gæren opnået fra trin (a). 2. fremgangsmåde ifølge krav 1, kendetegnet ved, at isoleringen omfatter høst ved centrifugering eller filtrering. 3. fremgangsmåde ifølge krav 1, kendetegnet ved, yderligere at omfatte trine- ne:
  9. c)vask af gærcellerne fra trin (b), - 29 -
  10. d)varmebehandling af gærcellerne fra trin (c), og
  11. e)eventuel tørring af produktet fra trin (d). 4. fremgangsmåde ifølge et hvilket som helst af kravene 1-3, kendetegnet ved, at minimalmediet er sammensat af råvarer af farmaceutisk kvalitet. 5. fremgangsmåde ifølge et hvilket som helst af kravene 1-4, kendetegnet ved, at gæren omfatter en art tilhørende slægten saccharomycetaceae, fortrinsvis saccharo- myces cerevisiae, saccharomyces boulardii sequela og/eller saccharomyces torula. 6. fremgangsmåde ifølge krav 5, kendetegnet ved, at gæren er saccharomyces cerevisiae. 7. selengærprodukt til brug i fødevarer, kosttilskud eller lægemidler, kende- tegnet ved,
  12. a)et indhold af organiske selenforbindelser svarende til mellem 1.000 og 1.600 ppm selen, fortrinsvis mellem 1.100 ppm og 1.500 ppm, mest fortrinsvis mel- lem 1.200 ppm og 1.400 ppm,
  13. b)at indholdet af l-selenomethionin konstant udgør mindst 55 % af det samle- de indhold af selen, at indholdet af selen i uorganiske selenforbindelser ud- gør højst 1 % af det samlede indhold af selen,
  14. c)at selengærproduktet er opnåeligt ved dyrkning af en gærkultur podet med en renkultur af en saccharomyces sp., fortrinsvis s. cerevisiae, s. boulardii seque- la og/eller s. torula, ved tilførsel af kilder til carbon, nitrogen og selen i mængder per tidsenhed, som svarer til den mængde, som kan optages i gæ- ren i et givet tidsrum, og at dyrkningen forløber i minimalmedium, der ude- lukkende består af oprensede, entydigt definerede næringsstoffer i form af råvarer, som beskrevet i farmakopé. 8. selengærproduktet ifølge krav 7, kendetegnet ved, at det er opnåeligt ved fremgangsmåden ifølge et hvilket som helst af kravene 1-6. 9. anvendelse af selengærproduktet ifølge krav 7 eller 8, til fremstilling af en fødevare. 10. anvendelse af selengærproduktet ifølge krav 7 eller 8, til fremstilling af et kosttilskud. 11. anvendelse af selengærproduktet ifølge krav 7 eller 8, til fremstilling af et lægemiddel. …” den 27. juni 2003 skrev patent- og varemærkestyrelsen til chas. hude efter styrelsens 2. be- handling af ansøgningen. det fremgår af brevet, at styrelsen mente, at de nye krav heller ik- - 30 - ke kunne godkendes i den nuværende form, dels fordi kravene fortsat angik uafhængige op- findelser, og dels fordi en del af opfindelsen fortsat ikke var tilstrækkelig tydeligt beskrevet. af patent- og varemærkestyrelsens brev fremgår nærmere herom bl.a.: ”… 2. som kravsættet nu er affattet, angår det to uafhængige opfindelser, nemlig: - fremgangsmåde til fremstilling af et selengærprodukt (kravene 1-6), selengærpro- duktet (krav 8), og anvendelse af produktet (dele af krav 9-1 1), og - selengærprodukt karakteriseret ved dets indhold af selen, l-selenomethionin, og gærens vækstbetingelser (krav 7 og dele af krav 9-11). selengærproduktet ifølge krav 7 er uafhængig af fremgangsmåden ifølge krav 1-6, da selengærproduktet ikke nødvendigvis er fremstillet ved denne fremgangsmåde. gærproduktet er nu præciseret ved angivelse af gærens vækstbetingelser, gærtype og dyrkningsmedium (krav 7c). disse betingelser svarer ikke til de dyrkningsbetingel- ser, som er angivet for fremgangsmåden ifølge krav 1. krav 1 og krav 7 må derfor præciseres således, at det klart fremgår, at det ved frem- gangsmåden ifølge krav 1 fremstillede gærprodukt er det samme gærprodukt, som er angivet i krav 7. fremgangsmåden skal således være opfundet til fremstilling af pro- duktet (se patenthåndbogens vejledning p. 5.4-2.2). hvis kravene ikke præciseres som anført ovenfor, skal kravsættet begrænses til den ene opfindelse. 3. deres krav 8 angår et selengærprodukt ifølge krav 7 fremstillet ved fremgangsmå- den ifølge krav 1-6. ved præcisering af krav 7 bliver krav 8 overflødigt og må udgå. …” den 14. august 2003 fremsendte chas. hude et nyt revideret kravsæt og en ændret beskrivel- se til patent- og varemærkestyrelsen som svar på styrelsens 2. behandling af pharma nords patentansøgning. det fremgår af følgebrevet hertil bl.a., at produktkravet (krav 7) var ændret til at omfatte samtlige tekniske træk indeholdt i fremgangsmådekravet (krav 1), og at krav 8 var udgået. patentkravene i chas. hudes reviderede udkast af 14. august 2003 svarer til patentkravene i det senere udstedte danske stridspatent (se ovenfor dommens s. 11-13). - 31 - det europæiske stridspatent pharma nord fik den 10. september 2008 udstedt europæiske patent på ”a selenium yeast product, a method of preparing a selenium yeast product and the use of the product for pre- paring food, a dietary supplement or a drug”. parterne er enige om, at krav 1-6 i det europæiske stridspatent (den danske oversættelse) i al væsentlighed er identiske med krav 1-6 i det danske stridspatent, samt at krav 8-10 i de to stridspatenter er identiske. det europæiske stridspatent indeholder følgende krav 7 (den danske oversættelse): ”… 7. selengærprodukt, kendetegnet ved, at det kan opnås ved en fremgangsmå- de ifølge et hvilket som helst af kravene 1-6. …” krav 7 i det europæiske stridspatent afviger fra krav 7 i det danske stridspatent (sammenlign ovenfor dommens s. 12-13). parterne er endvidere enige om, at beskrivelserne i de to stridspatenter i al væsentlighed er identiske, idet det europæiske stridspatent dog indeholder følgende afsnit, som ikke genfin- des i det udstedte danske stridspatent: ”… [0011] in a first aspect the invention thus relates to a selenium yeast product for use in food, dietary supplements or drugs, said product being characterized by having a content of organic selenium compounds corresponding to between 1000 and 1600 ppm, preferably between 1100 ppm and 1500 ppm, most preferably between 1200 ppm and 1400 ppm of selenium, and by the content at l-selenomethionine constantly constituting at least 55 % of the total selenium content, and by the content of seleni- um in inorganic selenium compounds not exceeding 1 % at the total selenium con- tent. …” - 32 - den europæiske patentansøgning og behandlingen heraf ved den europæiske patentmyndighed det europæiske stridspatent er udstedt på baggrund af en international patentansøgning indleveret af pharma nord til den europæiske patentmyndighed (epo) den 14. marts 2003 (wo 03/078605). beskrivelsen af opfindelsen i den internationale patentansøgning var en afskrift (på engelsk) af beskrivelsen i den danske patentansøgning af 15. marts 2002. patentkravene i den interna- tionale patentansøgning svarede (på engelsk) til det reviderede kravsæt, som pharma nord fremsendte til patent- og varemærkestyrelsen den 29. april 2003 (se ovenfor dommens s. 28- 29). den 2. januar 2008 fremsendte epo en behandlingsskrivelse til pharma nords patentagent, chas. hude, hvori det anførtes, at pharma nords patentansøgning ikke opfyldte kravene i den europæiske patentkonvention (epk). epo anførte uddybende herom bl.a.: ”… articles 84 and 83 epc … … a further deficiency was identified in claim 7. this claim refers to a selenium- containing yeast product which is obtainable by a method which does not involve: a. using glucose/maltose as the sole sources of carbon, or b. controlling the production of ethanol or the ph
(7c). the description, however, does not provide support and disclosure in the sense of articles 84 and 83 epc for a yeast product obtainable by such method. …” krav 7 blev af pharma nord herefter ændret således, at kravet fik et indhold svarende til det senere udstedte europæiske stridspatent (se ovenfor dommens s. 31). det europæiske stridspatent kom efter udstedelsen den 10. september 2008 under indsigelse fra den franske gærproducent, lesaffre. - 33 - i sit svar på indsigelsen af 22. januar 2010 fremkom pharma nord bl.a. med følgende argu- mentation imod de af lesaffre påberåbte modhold: ”… the skilled person is able to perform the method of claim 1 and will thus be able to manufacture the product according to claim 7. … the proprietor submits that p. 4, lines 6-13, of the application as filed makes it very clear that the subject matter of the present invention in a first aspect is the product, which has certain characteristics namely; ”[afsnit 0011 i beskrivelsen i det udstedte europæiske patent, jf. ovenfor]” it is obvious that this product is obtainable by the method of claim 1; otherwise, there would be no reason for this aspect to be mentioned. the fact that it is a first aspect emphasizes that this is the main scope of the invention. the characteristics of the product obtainable by the method of claim 1 are further supported by example 4, from which it appears that the selenium yeast product of the invention contains at least 55.3 % l-selenomethionine and less than 1 % sodium selenite (i.e. inorganic sele- nium). the information given by the opponent that the application as filed contained an in- dependent product claim obtainable by a more broadly defined method is not evi- dence that the method of claim 1 will not lead to the product of the first aspect of the invention as cited above. more likely, it will be the opposite, i.e. the more narrowly described method of claim 1 will fall within the scope of the broadly defined method of claim 7 of the application as filed. for this reason, the product obtainable by the more narrowly described method in claim 1 must have the same characteristics as the product obtainable by the more broadly defined method … … re. lack of patentability of claim 1 novelty … it is only in example 5 of d5 [wo98/37172; ikke fremlagt] that it appears that the yeast is fed with a glucose-based growth medium. every other example of the patent discloses the use of molasses as growth medium. however, from example 5 (and all other examples) it is evident (cf. p. 20 first paragraph) that the yeast culture was ini- tially grown in malt extract, which is a different carbon source than specified by claim 1 of the patent in suit. accordingly, d5 does not disclose that the sole source of carbon for cultivating the yeast is glucose or maltose. … - 34 - inventive step … d5 as closest prior art … the technical effect of the sole carbon source being glucose and/or maltose is a high degree of reproducibility of the quantity and quality of the selenium species formed in the yeast. i.e., the selenium yeast product obtained by this method contains a re- producible and homogenous amount of organic selenium compounds; more specifi- cally the product contains at least 55 % l-selenomethionine and less than 1% inorgan- ic selenium of the total selenium compounds in the yeast product (cf. p. 3, lines 8-12 and example 4 of the opposed patent). overall, the technical effect of the distinguishing features of the present invention over d5 is that a reproducible and homogenous selenium yeast product is obtained, wherein specifically, the product contains at least 55 % l-selenomethionine and less than 1% inorganic selenium of the total selenium compounds in the yeast product. none of the prior art documents pointed to by the opponent suggest a solution for obtaining a more reproducible and homogenous content of specific selenium com- pounds in the obtainable selenium yeast products. nor do they specify the quantity or the quality of the organic selenium compounds obtainable by the methods. more- over, none of the prior art methods provide a solution for obtaining a selenium yeast product wherein the amount of the toxic inorganic selenium constitutes less than 1 % of the total selenium compounds. … d1 [bilag h/af] as closest prior art … the distinguishing feature between the opposed patent and d1 is that d1 discloses the use of cane molasses in the feeding medium, whereas it is a feature of claim 1 of the opposed patent that the carbon source is glucose and/or maltose. … the technical effect of using glucose and/or maltose as the sole source of carbon in the feeding medium is that a high degree of reproducibility or the quantity and quali- ty at the selenium species formed in the yeast is obtained. i.e. the selenium yeast product obtained by this method contains a reproducible and homogenous amount of organic selenium compounds; more specifically the product contains at least 55 % l-selenomethionine and less than 1 % inorganic selenium of the total selenium com- pounds in the yeast product (cf. p. 3, lines 8-12, and example 4). as stated above, the prior art documents referred to by the opponent do not direct the person skilled in the art to a solution for obtaining a more reproducible and ho- mogenous content of specific selenium compounds in the obtainable selenium yeast products. nor do they specify the quantity or the quality of the organic selenium compounds obtainable by the methods. moreover, none of the prior art methods provide a solution for obtaining a selenium yeast product, wherein the amount of the toxic inorganic selenium constitutes less than 1 % of the total selenium compounds. - 35 - … i et afsluttende indlæg af 20. oktober 2011 gentog pharma nord i al væsentlighed sin argu- mentation for patenterbarhed. den 20. december 2011 blev der afholdt mundtlig hovedforhandling for opposition division i indsigelsessagen. i referatet fra hovedforhandlingen er pharma nord refereret for at anføre bl.a.: ”… turning to d1 [bilag h/af] the patentee referred to table 1, right-hand column (mbrt assays) as showing that these yeasts have a significant amount of non- organically bound selenium. culturing on molasses would furthermore not yield reproducible results, see also ta- bles 1 and 2 of d4 [bilag h/q]. the pooling of data in those tables probably indicates a high variability in the results. finally the patentee pointed at the reference example in the patent as evidence that replacing glucose by molasses does not yield a product having the claimed characteristics. replying to a question of the opposition division the patentee stated that there is a great difference in taste and smell between a yeast product grown on molasses and on glucose. …” den 11. maj 2012 traf opposition division afgørelse, hvorved indsigelsen blev afvist. opposi- tion division anførte som begrundelse for afgørelsen bl.a.: ”… 5. novelty (article 100(
  1. a)and 54 epc) 5.1 o [lesaffre] considers that d5 [wo98/37172; ikke fremlagt] anticipates claims 1 to 10 and that d1 [bilag h/af], d2 [bilag h/az], d4 [bilag h/q] and d5 anticipate claims 7 to 10. with respect to claims 7 to 10, o is of the opin- ion that growth on molasses or on glucose/maltose does not make any dif- ference for the final product. 5.2 p [pharma nord] noted that d5 does not disclose all the technical features of claim 1 and that the burden of proof lies with o to show that selenium yeasts produced by a different process are identical to yeast obtainable by the pro- cess of the present claims 1 to 6. p also noted that yeasts produced on molas- ses are intrinsically different from yeasts produced on glucose/maltose (e.g. different smell and taste). - 36 - … 5.4 novelty of claims 7 to 10 over d1 [bilag h/af], d2 [bilag h/az], d4 [bilag h/q] and d5 [wo98/37172; ikke fremlagt] 5.4.1 claim 7 corresponds to a so called ”product by process” claim. it has some technical features which are explicitly and directly mentioned in claim 7 and other which are a consequence of the fact that it is obtainable by a method according to claims 1 to 6. the only technical feature explicitly and directly mentioned in claim 7 is that the product is a selenium yeast product. this technical feature is construed as a product comprising selenium yeast. the yeast may have been subjected to some treatment (e.g. washing, heat treatment, drying etc.) but the whole yeast dry matter is present in the product. claim 7 does not encompass (par- tially) purified products obtained from a selenium yeast (e.g. selenomethio- nine or a particular protein fraction of the yeast). the technical features which can be derived from the terms ”obtainable by a method according to any of claims 1 to 6” are more difficult to determine precisely. the only technical feature which is necessarily present is the con- centration of selenium. this derives from the fact that at the end of step (
  2. a)of claim 1 the yeast has a concentration of selenium of between 1 000 to 1 500 ppm calculated on dry matter in the yeast, that step (
  3. b)directly follows step (
  4. a)and that implicitly no further cultivation step takes place after step (b). the od [opposition division] does not consider that the reference to the methods of claims 1 to 6 implies a precise value for the concentration in se- lenomethionine or selenium selenite. in particular, it does not imply the ex- act values of the example 4 of the present application. variations in the culti- vation parameters within the frame of claims 1 to 6 may lead to significantly different values (different yeast strain, different selenium source, variation within the ph range, etc.). however, in absence of evidence to the contrary, it is considered that the methods of claims 1 to 6 allow to combine a higher proportion of selenomethionine and a lower amount of sodium selenite in strains having between i 1 000 and 1 500 ppm of selenium than the same methods using molasses instead of glucose and/or maltose as carbon source. a certain number of other technical features derived from the terms ”obtain- able by a method according to any of claims 1 to 6” are also present even if they cannot be identified precisely. in each particular growth condition, the yeast adapts its metabolism and it is probably extremely difficult, if not im- possible, to find two significantly different growth conditions leading to the exact same yeast (same protein profile, same lipid profile, same content in various metabolites, etc.). in addition, the use of particular substrates com- prising particular compounds may lead to the presence of said particular compounds (or derivatives thereof) in the yeast at the end of the cultivation. for example molasses comprise undefined compounds which are found in the yeast at the end of the cultivation and which may be used to differentiate said yeast from yeast cultivated on glucose/maltose media. in this respect, p states that yeast grown on molasses have a particular odor and taste which - 37 - are not present in yeasts grown on glucose. d7 [bilag h/al] also mentions that yeasts grown on molasses have a different color (see d7, page 117, left- hand column, lines 1 to 4). with respect to the present discussion, it is important to keep in mind that the complexity of living organisms cannot be compared to the complexity of a purified product (e.g. a protein) and that a reasoning applying to a purified product cannot be directly applied to living organisms. it is expected that living organisms produced under different growth conditions are always different (different protein profile, different lipid profile, different content in various metabolites, etc.). therefore, in term of patent law, the od considers that the burden of proof lies on the party wishing to establish that cells pro- duced under significantly different growth conditions are identical (i.e. the party wishing to establish that a very unlikely event indeed takes place). this implies that, in absence of evidence to the contrary, it should be consid- ered that a yeast product according to claim 7 cannot be obtained by a meth- od significantly different from the method of claims 1 to 6. 5.4.2 novelty over d5 [wo98/37172; ikke fremlagt] … in this respect, the od notes that o fails to raise a concrete objection since he does not identify a particular method disclosed in d5 which would lead to the yeast of claim 7. there is no evidence on file that molasses and potato dextrose broth, the carbon sources listed in d5 in addition to glucose (see d5, page 8, lines 11 to 22), would be suitable to obtain the yeast of claim 7. there- fore, in order to obtain a yeast according to claim 7, it is necessary to use a glucose medium. … … 5.4.3 novelty over d1 [bilag h/af] in view of the above discussion with respect to d5, it appears that d1 cannot anticipate claim 7. first, all the growth media of d1 contain molasses and as discussed above yeast grown on molasses are different from yeasts grown on glucose/- maltose. for this sole reason the yeasts of d1 do not anticipate claim 7. second, it can be noted that the yeasts having the appropriate concentration of selenium (between 1000 and 1500 ppm) are only three. they correspond in table 1 of d1 to ”wild hs added continuously”, ”wild hs added as a sin- gle dose” and ”fd14 ls added continuously”. the first two yeasts were cul- tivated with a high selenium feeding (continuous or single dose) which lim- ited both the growth of the yeast and the intake of selenium (much more se- lenium is present in the yeast cultivated with a lower concentration of sele- nium (”wild ls”) (see d1, table 1). in addition, for these yeasts the concen- tration of ethanol 7,35 g/l and 2,8 g/l is higher than the concentration allowed by the method of claims 1 to 6 (i.e. 1 % ethanol). all these differences in the growth media/growth parameters inevitably have consequences on the na- ture of the yeast obtained (different distribution of the selenium, in- - 38 - creased/decreased expression of some enzymes, etc.) and, in absence of evi- dence to the contrary, it cannot be considered that the yeasts of d1 can be obtained by using the method of the present claims 1 to 6. in addition, the mbrt (methylene blue reduction time) value, which gives a qualitative in- dication on the content in inorganic selenium, seems to indicate that the con- tent in inorganic selenium is high in these three yeasts, in particular in the yeasts corresponding to ”wild hs added as a single dose” and ”fd14 ls added continuously” (see d1, table 7). here again, to prove that the inor- ganic selenium content in these strains is obtainable by the methods of claims 1 to 6, appropriate evidence would have been necessary. in view of the above reasoning, the subject-matter of claim 7 is considered novel over d1. 5.4.4 novelty over d2 [bilag h/az] and d4 [bilag h/q] the same reasoning as above applies mutatis mutandis to d2 and d4. the growth conditions used in d2 and d4 are significantly different from the growth conditions of the methods of claims 1 to 6 (e.g. d2 relates to batch cultures and d4 uses molasses as carbon source). it is further noted that in d2 the proportion of inorganic selenium remains significantly higher than in the example 4 of the present patent (less than 1 % in the present patent, 5% at best in d2; see the patent example 4; d2, page 46, table 6). therefore, the burden of proof lies with o to demonstrate that the selenium yeast product obtained in d2 and d4 are identical to selenium yeast product obtainable by the method of claims 1 to 6. o does not provide the appropriate evidence. therefore, he fails to demonstrate that at least one of the selenium yeast products generated in d2 or d4 anticipates claim 7. in view of the above reasoning, the od considers that the subject-matter at claim 7 is novel over d2 and d4. 5.4.5 the reasoning with respect to claim 7 applies mutatis mutandis to claims 8 to 10 which correspond to uses of the selenium yeast product of claim 7. 6. inventive step (article 56 epc) 6.1 the reasoning of o can be summarized as follows: - d1 [bilag h/af] is the closest prior art. - the difference with claim 1 is the use of maltose/glucose instead of molasses as carbon source. - this difference is not related to any technical effect. in particular, it is not correlated with an improved selenium profile (higher level of or- ganically bound selenium and lower level of inorganic selenium). in this respect, the post-published document d8 [bilag h/ø] shows that differences in the feeding medium do not necessarily lead to differ- ences in selenium contents. - 39 - - the objective technical problem is the provision of a mere alternative to the method of d1. - the solution to the technical problem is obvious in view of for exam- ple d7 [bilag h/al] which indicates that glucose syrup can be used as an alternative to molasses in fed-batch cultures to improve both yields and reproducibility. in addition to d7, d3 [ikke fremlagt under sagen] and d6 [bilag h/bd] disclose alternative carbon sources which corre- spond to carbon sources according to claim 1
  5. a)ii). 6.2 p essentially disagrees with the reasoning of o in the formulation of the technical problem and considers that the problem is to provide a method al- lowing to improve the selenium profile and the reproducibility. p further considers that the documents used in combination with dl, namely d3, d6 [bilag h/bd] and d7, do not disclose a carbon source in accordance with claim 1)
  6. a)ii). 6.3 claim 1: 6.3.1 choice of the closest prior art: both parties consider that d1 is the closest prior art. the od agrees with this choice. since d1 discloses many different experiments, it is further necessary to select an experiment of d1 from which the skilled person would start. this experiment should be selected from the experiments of d1 considered as good starting point for further development. in view of the conclusion of d1, the skilled person would consider that fed-batch fermentation has to be used and that low selenium concentration is preferable to maximise the yield (see d1, table 1 and page 2499, right-hand column, third paragraph). o se- lects the culture corresponding to ”fd14 ls added continuously” as starting point for further development. the proprietor [pharma nord] considers that the skilled person would not start from ”fd14 ls added continuously” be- cause the mbrt value is very low (reflecting higher content in inorganic se- lenium). the od also considers doubtful that the skilled person would select as start- ing point a culture with one of the lowest mbrt value since it is clearly one of the goals of d1 to have a low content in inorganic selenium. therefore, it is believed that the skilled person would rather have used the strains characterised as ”fd10 ls added continuously” or ”wild ls added continuously”. this choice has however no influence on the reasoning below. for the sake of the discussion, it can be considered that the skilled person uses the three strains ”fd14”, ”fd10” and ”wild” with low selenium and fed batch culture as starting point for further developments. 6.3.2 the differences relevant for inventive step are according to both o and p the choice of the carbon source. - 40 - the od considers that there is at least another important difference: the se- lenium content of the final yeast product. even, if one of the strains selected (”fd14 ls added continuously”) provides a selenium content within the range of claim 1, this selenium content is a mere consequence of the particu- lar growth conditions used. there is absolutely no motivation in d1 to limit the selenium content below 1500 ppm. therefore, this difference has also to be taken into consideration. in particular, it cannot be assumed that modify- ing the growth conditions would be without effect on the selenium content. this difference in the selenium content of the final yeast product is due to the fact that the selenium is not being fed to the yeast during the cultivation to an extent corresponding to the consumption of said nutrient (even if a very broad interpretation of these terms is used). this fact can be illustrated by two aspects of the results presented in d1: - in the three cultures selected as starting point for the inventive step reasoning (”fd10 ls added continuously”, ”fd14 ls added continu- ously” and ”wild ls added continuously”), about the same biomass is obtained (41,3 to 45,2 g/
  7. l)but the amount of selenium varies signifi- cantly (1466-2495 ppm) (see d1, table 1). since the same amount of se- lenium is provided in the growth medium, this implies that, in order to have below 1500 ppm of selenium, a very large part of the selenium present in the growth medium is not incorporated in the yeast. - even in the low selenium growth conditions of d1 the ratio seleni- um/carbon source is about 50 times higher than in the example 1 of the present patent (530 g/l cane molasse and 31,6 g/l of sodium sele- nate in the same medium (i.e. provided proportionally) in d1 to be compared to 1 060,5 g glucose and 1,2758 g of sodium selenite in the patent) (see d1, the ”materials and methods” section, page 2497, left- hand column, third and fifth paragraph). this implies that in all the experiments of d1 most of the selenium is not incorporated in the yeasts. as a further difference, it can also be noted that in the last 30 hours of culti- vation (about one third of the total cultivation time) no selenium addition takes place (see d1, the figures 2 and 4; the medium identified as ”cmf1” does not comprise sodium selenate). such a step is clearly not encompassed by the wording of claim 1. 6.3.3 p considers that the use of glucose/maltose in the method of claim 1 allows to improve the selenium profile and the reproducibility. the basis for this statement is the comparative example of the example 4 of the patent. in this respect, during the oral proceedings p stated that the comparative example was made using exactly the same experimental conditions except that mo- lasses were used instead of glucose. on the basis of the post-published document d8 [bilag h/ø], o contests the fact that this result can be generalised. d8 discloses yeast strains (identified as ”cypress systems” in the table 2 of d8) grown on molasses having a sele- - 41 - nium profile similar to the yeasts of the example 4 of the present patent grown on glucose. from this result, o concludes that the carbon source has no influence on the selenium profile of the yeast. however, since the method used to obtain the ”cypress systems” yeasts of d8 is not disclosed, the reasoning of o is without merit. the problem is not to show that alternative methods using molasses allow to obtain a selenium profile comparable to the profiles of the examples of the patent but to show that the replacement of molasses by glucose and/or maltose in the context of the method of claim 1 does not improve the selenium profile. in the absence of a disclosure of the method used to obtain the ”cypress systems” yeasts of d8 , it is impossible to come to any conclusion. as already mentioned in the context of the objections under article 100(
  8. b)epc, o considers that the methods of the examples do not fall within the scope of the present claim 1 and that the technical effect observed in the ex- amples (i.e. improved selenium profile) cannot be considered to be present in the context of the method of claim 1. the od notes that the potential dif- ferences (last hour of culture without nutrient and selenium feeding, to much yeast extract to consider that the medium is a minimal medium, etc.) correspond to marginal aspects and that appropriate evidence would be re- quired to consider that these differences, if they can indeed be considered as differences, have a noticeable influence on the technical effect (i.e. prevent the improvement of the selenium profile). in absence of any evidence suggesting that the technical effect observed in the example 4 of the patent is not present in the context of claim 1 and can- not be generalised over the whole scope of claim 1, the objective technical problem is considered to be the provision of a method of preparing a seleni- um yeast product having an improved selenium profile (higher level of or- ganically bound selenium and lower level of inorganic selenium) and an im- proved reproducibility. 6.3.4 d7 [bilag h/al] discloses that in fed-batch cultures, glucose syrup cultiva- tion gives a higher productivity and overall cell yield than those of molasses cultivation and notes that molasses have unpredictable variations in quality (see d7, page 117, left-hand column, lines 1 to 5 and page 123, left-hand col- umn, first three lines). therefore, starting from d1 [bilag h/af] and being aware of d7, the skilled person would have had the motivation to replace molasses with glucose syrup in order to improve the reproducibility and overall cell yieds. it can also be admitted, as argued by o, that any addition- al effect due to the replacement of molasses by glucose syrup according to d7 is a bonus effect. however, the question remains whether the use of glucose syrup according to d7 in the methods of d1 would lead to the method of the present claim 1. at least two potential differences can be identified: - the carbon source - 42 - - the selenium content / the rate at which the selenium is provided to the yeast (both aspects are intrinsically related) 6.3.4.1 o considers that all glucose syrup are equivalent and is of the opinion that, if the glucose syrup of the examples of the patent is a carbon source compris- ing solely glucose and/or maltose, the same has to be true for the glucose syrup of d7. the od cannot share this opinion. the proportion of glucose in a glucose syrup as reflected by the measure of the dextrose equivalent (
  9. de)(100 de corresponds to 100 % glucose) can broadly vary. the pharmaceutical grade glucose syrup of the examples of the patent is certainly not the same product as the glucose syrup from cassava starch of d7. it can be accepted that pharmaceutical grade glucose syrup is a carbon source comprising solely glucose and/or maltose but there is no evidence that the same would be true for the glucose syrup from cassava starch according to d7. it is more than likely that a significant amount of higher size carbon molecules are also pre- sent. in addition to the combination with d7, o cites d3 [ikke fremlagt] and d6 [bilag h/bd]. in particular o relies on the passages related to molasses alter- natives disclosed in d3 and d6, namely ”corn syrups of high dextrose equivalent” and ”corn syrup consisting almost entirely of glucose (96de)” (see d3, page 600, second paragraph; d6, page 278, first full paragraph). however, he fails to establish that the corresponding corn syrup can be con- sidered to comprise glucose and/or maltose only (i.e. that no higher size sugar are present in significant amount). in addition, o does not indicate any element suggesting that the skilled person would be motivated to further modify the teaching of d7 in the light of d3/d6. in the context of a bonus ef- fect, the skilled person has to be in a one-way street situation. this is not the case anymore if the teaching of d7 has to be modified in the light of further documents without a strong motivation to do so. 6.3.4.2 with respect to the second potential difference, the consequences of replac- ing molasses by a glucose syrup in the method of d1 on the selenium con- tent of the yeasts cannot be predicted. in addition, as already discussed above the selenium is clearly not being fed to the yeast to an extent corre- sponding to its consumption, a fortiori if the selenium content in the seleni- um yeast has to be in the range 1000-1500 ppm since most of the selenium provided during cultivation would not be incorporated in the yeast. o does not mention any other document, susceptible to be combined with d1 and d7, which would suggest a modification in the rate of selenium de- livery and/or a modification of the total selenium amount provided during cultivation. therefore, none of the combinations of documents identified by o lead to the method of the present claim 1. 6.3.5 in the light of the above reasoning claim 1 is considered to involve an in- ventive step. - 43 - 6.4 if claim 1 involves an inventive step all dependent claims also involve an in- ventive step, therefore claims 2 to 6 involve an inventive step. 6.5 with respect to claims 7 to 10, the reasoning used in the novelty section ap- plies mutatis mutandis in absence of evidence to the contrary yeasts obtained using significantly different growth conditions cannot be considered to be identical. in addition, in absence of evidence to the contrary, there is a clear difference between the yeast of claim 7 and the yeasts obtainable by combining d1 and d7: the amount of selenium in the selenium yeast obtained by combining d1 and d7 cannot be predicted and cannot be considered to be in the range 1000 - 1500 ppm in view of the large quantities of selenium present in the growth medium. therefore, claim 7 and all claims referring to the corresponding selenium yeast, namely claims 8 to 10 involve an inventive step (article 56 epc). …” modhold der er i forhold til stridspatenterne fremlagt en række modhold og hertil relateret materiale fra både før og efter stridspatenternes prioritetsdato, den 15. marts 2002. us-patent 4.530.846 (bilag h/
  10. q)us-patent 4.530.846 (bilag h/
  11. q)udgør sagernes centrale modhold, både i relation til spørgs- målet om nyhed og spørgsmålet om opfindelseshøjde. us-patentet blev af patent- og vare- mærkestyrelsen under behandlingen af ansøgningen om det danske stridspatent anset som nærmest kendte teknik i forhold til det danske stridspatent. det er desuden us-patentet, der omtales som ”d4” i afgørelsen fra epo’s opposition division. ansøgning om us-patentet blev indgivet den 15. februar 1983, og patentet blev udstedt den 23. juli 1985. indehaver af patentet er universal foods corporation. opfinderen angives i pa- tentet som værende tilak nagodawithana. us-patentet angår ”a method for the production of selenium yeast”. fremstillingen af se- lengær i henhold til us-patentet sker ved brug af selenit som selenkilde og melasse som kul- stofkilde. - 44 - af us-patentets beskrivelse fremgår om opfindelsen bl.a.: ”… the objects of the invention accordingly, one of the objects of the present invention is the provision of a method for producing a selenium yeast having an enhanced intracellular selenium content. another object is the provision of a method for producing a food yeast having high levels of organically bound intracellular selenium in an assimilable non-toxic form. a further object is the provision of a method and process for producing an edible food yeast product having a high intracellular selenium content which is useful as a dietary supplement. a final object is the provision of a food yeast having a uniformly distributed intracel- lular selenium content of high concentration, but which is essentially free of the toxic risk of free selenium as established by the methylene blue reduction test. summary of the invention the foregoing objects are achieved by a process and method for preparing an edible selenium yeast product which has a high intracellular, organically bound, assimilable selenium content, which process comprises continuously and incrementally feeding a substantial quantity of a soluble selenium salt to a food yeast such as saccharomyces cerevisiae maintained in a growth medium under aerobic yeast growth conditions in conjunction with the incremental addition of a carbon nutrient source such as molas- ses wort, to said medium, to support the growth the growth of the yeast. the growth medium is further characterized by low levels of inorganic sulfur nutrients. ”low levels” of inorganic sulfur means less than about 0.5 % and preferably about 0.1 % to 0.2 % sulfur on a yeast solids basis. broadly however, the inorganic sulfur content of the nutrient media should be maintained at sufficiently low levels so as not to sub- stantially adversely affect the yield of yeast produced by the process. after the growth cycle is completed, the yeast is harvested from the fermenter such as by centrifugation and washed essentially free of extracellular, water-soluble resid- ual selenium compounds to produce an edible selenium yeast which is characterized by an intracellular organically bound selenium content of at least 1000 ppm and characterized by being essentially free of extracellular inorganic selenium as deter- mined by the methylene blue reduction test. yeast products with intracellular selenium contents of 1000 ppm or more are achieved by the continuous incremental feeding of soluble selenium compounds to the nutrient growth media for the yeast at levels which are as high as 128 ppm on a fermenter volume basis or about 0.4 % se in the molasses which is incrementally fed to tie fermenter. … - 45 - … it has been found that incremental addition of the selenium salt throughout the yeast fermentation and growth process obviates these undesirable adverse results. the continuous incremental addition of the selenium salts or compounds can readily be carried out by mixing the selenium compounds with the molasses feed (wort) which is also continuously added to the yeast fermenter. … … in the present process, the yeast is washed up to as many as seven
(7)to ten
(10)times or as necessary to reduce or substantially remove the extracellular nutrients and extracellular selenium salts from the yeast by re-suspending the yeast in water (diluted in ratios of about 1:10). when washing is completed the yeast is reduced in the moisture content to a cream (16 % yeast solids) followed by pasteurizing and drum drying so at to reduce its moisture content to about 4 to 5 % to produce a dried yeast product. the pasteurization should be carried out at 85°c for 45 minutes in cream stage or similar or equivalent conditions to non-viable yeast product. incremental feed, as used above, refers to the practice of adding the molasses and other nutrients to the fermenter liquid-yeast mixture preferably at such a rate that the molasses is consumed by the yeast at the same rate it is added. since the yeast popu- lation increases with the growth cycle, the rate at which the nutrient added is con- sumed is also increased. in the process of this invention, the selenium salts are added continuously and incrementally as a separate feed or admixed with the molasses wort, by the technique discussed above. the dried yeast is tested for extracellular inorganic selenium by the methylene blue reduction test (mbrt) … … the time of test indicates the presence of inorganic selenium. more than fifteen
(15)or twenty
(20)minutes indicates a sufficiently low extracellular inorganic selenium content. for example, baker’s yeast without any selenium will give an mbrt of nine- ty
(90)to one hundred and fifty
(150)minutes. yeasts with substantial extracellular selenium, e.g. 10 ppm, will give mbrt times of from 0.5 to 7 minutes. … additionally, the procedures of the present invention are carried out without the ad- dition of ammonium sulfate and without the use of sulfuric acid for ph adjustment which procedures are conventional in commercial yeast manufacture processes. description of the preferred embodiment the following examples 1-6 illustrate the results obtained by the use of the method of the present invention, in the propagation of selenium yeast in a ten
(10)liter ferment- er, as contrasted with other procedures (examples 7) wherein a selenium salt was fed periodically to the fermenter. in examples 1-6, a calculated amount (2800 mg.) of water-soluble selenium com- pound, particularly sodium selenite (na2seo3), was mixed with 1600 grams of molas- ses wort used as the carbon source nutrient added continuously over a fermentation period of 16½ hours and was added to the yeast pitch (65 grams) in 7000 ml of water in a ten
(10)liter fermenter. … … - 46 - sixty milligrams of znso4.h2o was added to the 1600 grams of molasses used. am- monium hydroxide was added on demand to maintain ph at 5.2 (approximately 100 mls. of 29.8 % ammonium hydroxide) throughout fermentation. temperatures were maintained at about 29°-30° c. aeration was continuous throughout the process to maintain aerobic yeast growth condition. when the fermentation was complete, the yeast was separated, washed seven
(7)times with water (1:10 dilution), reduced in moisture content to a yeast cream (16-18 %, yeast solids) and pasteurized at 85° c for forty-five
(45)minutes followed by drum drying to a final moisture content of about 4.5 % (based on dry yeast solids). … … comparison of yeast data …: examples 1-6 se content in dried yeast, µg/g (ppm) 2000 methylene blue reduction test (mbrt), min. 90 … from the foregoing, it is evident that high contents of organically bound intracellular selenium in yeast can be attained by feeding selenium continuously and incremental- ly and simultaneously with carbon source nutrient to the yeast throughout during the yeast growth. the principles of the process of the present invention may be applied to other food grade or edible yeasts other than the illustrated baker’s yeast or saccharomyces cere- visiae, such as for example, brewer’s yeast or saccharomyces uvarum or the like. while intracellular selenium contents of yeasts are preferably in the range of 1000 ppm, or more, even as high as 2500 ppm, the process has, as its practical limitations, the ca- pacity of the yeast to assimilate the selenium during the yeast growth cycle without adverse effects on yield due to the selenium additive to the nutrients. it should also be understood that the principles of maintaining low levels at inorgan- ic sulfur in the nutrient media is broadly applicable to the process of producing sele- nium yeasts. for this reason, adjustment of ph should avoid the use of sulfuric acid as a ph regulator, in favor of non-sulfur containing ph adjustment reagents such as hydrochloric acid. what is claimed is:
  1. a process for producing an edible selenium yeast product suitable for mammalian consumption having an organically bound selenium content of at least about 1000 ppm on a dry yeast weight basis … …” - 47 - demirci-artiklen (bilag h/af) et andet væsentligt modhold i sagen er en artikel fra 1999 skrevet af ali demirci m.fl., ”en- hanced organically bound selenium yeast production by fed-batch fermentation” (bilag h/af). det er denne artikel, der omtales som ”d1” i afgørelsen fra opposition division. artiklen beskriver en fremgangsmåde til fremstilling af selengær. fremstillingen af selengær i henhold til artiklen sker ved brug af selenat som selenkilde og melasse som kulstofkilde. af artiklen fremgår om fremgangsmåden bl.a.: ”… introduction … in this paper, we developed a fed-batch fermentation protocol for the production of organically bound selenium by using a wild strain of s. cerevisiae and two adapted strains obtained during our previous study (demirci and pometto, 1999). materials and methods … analysis. … to detect the presence of organically bound selenium, samples were ex- amined by the methylene blue reduction time (mrbt) assay (nagodawithana et al., 1985). … results and discussion medium composition. the attempts to optimize medium composition for high bio- mass production demonstrated that use of cane molasses was crucial for yeast growth due to the presence of micronutrients. therefore, the starting base medium in the reactor and feeding medium required cane molasses as the sole carbon source. … … sodium selenate feeding. … … to make a comparison, atomic absorption analysis and an mbrt test were per- formed on two different commercially available selenium yeasts: red star se yeast and nutrex se 1000 (red star of universal foods, milwaukee, wi). selenium concen- tration and mbrt were 1251 µg/g of dry biomass and 5.5 min, respectively, for red star se yeast and 857 µg/g of dry biomass and 0.4 min, respectively, for nutrex se
  2. we assumed that red star se yeast was produced by using the protocol sug- gested by nagodawithana et al.
(1985). they demonstrated minimum 1000 µg/g of dry biomass, which was also confirmed by our analysis. however, the organically bound selenium yeast produced in this study demonstrated 2 times more selenium - 48 - incorporation and higher mbrt, which indicated improved production of organical- ly bound selenium. …” øvrige modhold og relateret materiale lallemand har herudover fremlagt en række øvrige modhold og relateret materiale, hvoraf en del har til formål at belyse indholdet af nogle af de selengærprodukter, der blev fremstil- let og solgt før prioritetsdagen. blandt dette materiale kan fremhæves bl.a. følgende (i kronologisk rækkefølge): • en lærebog fra 1991 vedrørende gærteknologi, ”yeast technology – second edition”, af bl.a. tilak nagodawithana (bilag h/bd). denne lærebog betegnes ”d6” i afgørelsen fra oppo- sition division. lærebogen angår ikke specifikt selengær, men gær i almindelighed, her- under bagegær. det fremgår af lærebogen bl.a.: ”… baker’s yeast production … during the last century, the major advances in the production of baker’s yeast have been the following: …
  1. fed-batch process. the use of incremental feeding (called zulauf process in german) was introduced between 1910 and 1920 by danish and german scientists. this pro- cess is used today because it is the only practical method that permits production of yeast biomass without simultaneous production of sizable quantities of ethanol.
  2. molasses. at the turn of the century, the mash bill consisted principally of corn, malt, and malt sprouts. during the 1920s and 1930s, the grains were slowly re- placed with molasses as carbon and energy source for yeast growth. … principles of aerobic growth growth rate … commercial yeast fermentations are always carried out as fed-batch fermentations. … - 49 - oxygen requirement and aeration … the purpose of a baker’s yeast plant is to maximize growth of yeast and to minimize alcoholic fermentation. … if these conditions are not met, ethanol will be formed dur- ing the fermentation regardless of the aerobicity of the process. … raw materials carbon and energy source historically, the major source of carbon for yeast growth was maltose derived from malt-converted grain mashes. today, glucose, fructose, sucrose, and a portion of raf- finose from molasses serve universally as the carbon source. … … the price of molasses is largely determined by its value as a feed. in the fermenta- tion industry, its major use is for the production of baker’s yeast and glutamate. … … alternate carbon substrates at present, molasses is the least expensive source of sugar for growing baker’s yeast. but prices for molasses fluctuate greatly and on occasion they have approached those of corn-derived sugars. therefore, other carbohydrate sources have been investigat- ed. ultimately, the most abundant source of fermentable sugar will be glucose de- rived from cellulose. corn syrups consisting almost entirely of glucose (96 de) are potentially a good source. bronn
(1985)provided convincing evidence that corn syr- up is a suitable raw material providing growth rates, yields, and bake performance equal to molasses-grown yeast. he estimated that replacement of molasses with high de corn syrup will lower the chemical oxygen demand (cod) of waste streams (fer- menter beer without yeast, water used in washing yeast) by 80 %. … practice of aerobic growth … fermentation … utilization of ethanol overfeeding or underaeration of a fermentation leads to the formation of ethanol. al- cohol levels up to 0.05 % indicate satisfactory performance, but levels above 0.1 % re- sult in some loss of yield. … automatic process control … the determination of ethanol in the fermenter liquid may also be used to control feed rates. …” - 50 - • en artikel fra 1996 af s. s. win m.fl., ”growth kinetics of saccharomyces cerevisiae in batch and fed-batch cultivation using sugarcane molasses and glucose syrup from cassava starch” (bilag h/al). denne artikel betegnes ”d7” i afgørelsen fra opposition division. i artiklen, der angår dyrkning af bagegær, sammenligner forfatterne brugen af melasse med brugen af industriel glukose som kulstofkilde. det konkluderes i artiklen bl.a., at dyrkning på glu- kosesirup gav højere produktivitet og celleudbytte i en fed-batch fermentering end dyrk- ning på melasse. • en artikel fra 1996 af dr. larry clark m.fl., ”effects of selenium supplementation for cancer prevention in patients with carcinoma of the skin” (bilag h/ba). denne artikel omhandler et kræftstudie udført af forfatterne. det anføres, at der til brug for studiet er anvendt se- lengær fra nutrition
  1. • interview (part 1) af drs. larry clark og lon baugh udført af dr. richard passwater (bi- lag h/ah). det fremgår ikke af denne første del af interviewet, hvornår det er offentlig- gjort, men der er mellem parterne enighed om, at den første del af interviewet er offent- liggjort før oktober
  2. af interviewet fremgår om selenoprecise-produktet bl.a.: ”… clark: no! only the trademark name has changed. the high-selenium yeast that i have used in all of my clinical studies, as well as that being used in the studies that will get underway shortly, is now called selenoprecisetm. the selenium that we used is our trial was produced by cypress systems of fresno, california. this company continues to produce it by the precise method previously used and it continues to achieve the same high-quality product. … … baugh: there are several manufacturers of selenized yeast currently in the united states and canada, and of these, the only one that certifies and guarantees the organ- ically bound selenium at a level approaching 100 percent (98-99 percent). this is the selenoprecisetm product. …” • interview (part 2) af drs. larry clark og lon baugh udført af dr. richard passwater (bi- lag h/å). denne anden del af interviewet er offentliggjort i oktober
  3. af interviewet fremgår om selenoprecise-produktet bl.a.: - 51 - ”… baugh: … it is essential to provide a high oxygen environment at the end of fermentation so that all the baby buds or daughter ceils become mature and develop good mem- branes. when growth and maturation are complete, the yeast goes through a series of washes with clean pure water. the selenoprecisetm product requires four washes with 2x volumes of water to remove any trace of remaining waste products or the in- organic salts. the washed liquid yeast is analyzed for the presence of selenium salts and then sterilized and spray-dried. … passwater: dr. baugh, you told us why you feel that selenoprecise tm yeast shows minimal batch-to-batch variation? how can we be sure? baugh: cypress systems provides a complete certificate of analysis on each batch produced. of all the batches produced in 1997, there was a +/- five percent variation in selenium concentration. the reason we have that accuracy is due to the automated control systems during the growth of the yeast. selenoprecisetm yeast is certified to be at least 98 % organically bound yeast with no inorganic selenium present and this leaves little room for variations in batches. …” • en artikel fra 1999 af mihály kotrebai m.fl., ”selenium speciation in enriched and natural samples by hplc-icp-ms and hplc-esi-ms with perfluorinated carboxylic acid ion-paring agents” (bilag h/ak). i artiklen har forfatterne analyseret med hplc-icp-ms og hplc- icp-ms for indholdet af selenat og selenmethionin i bl.a. et selengærprodukt fra nutriti- on 21 (1.922 ppm), som anføres at have været anvendt i det tidligere kræftstudie udført af larry clark. det anføres, at indholdet af selenat var 1 %, og at indholdet af selenmethion- in var 85 %. • en artikel fra 2003 af peter uden m.fl., ”element selective characterization of stability and re- activity of selenium species in selenized yeast” (bilag h/ae). i artiklen, der er publiceret efter prioritetsdatoen, har forfatterne analyseret en række prøver af selengær, både prøver ta- get fra rågær (rent gær) og prøver taget fra tabletter, for indhold af bl.a. selenit og selen- methionin. forfatterne har blandt andet analyseret en prøve fra en selenoexcell-rågær fra cypress systems på 1.250 ppm. det fremgår af artiklen, at indholdet af selenit ikke over- stiger 1 % i nogen af de analyserede rågær-prøver. de analyserede tablet-prøver angives at have et indhold af selenit på mellem 3,3 % og 11 %. indholdet af selenmethionin oply- - 52 - ses i artiklen at være mellem 62,5 % og 89,1 % i de analyserede rågær-prøver og mellem 7,4 % og 24,6 % i de analyserede tablet-prøver. det fremgår ikke af denne artikel, hvornår selengærprodukterne (rågæren og tabletterne), som prøverne er taget fra, er markedsført. • en artikel fra 2004 af erik larsen, helge paulin og sven moesgaard m.fl., ”speciation and bioavailability of selenium in yeast-based intervention agents used in cancer chemoprevention studies” (bilag h/ø). denne artikel betegnes ”d8” i afgørelsen fra opposition division. i artiklen, der er publiceret efter prioritetsdatoen, beskriver forfatterne analyser af en ræk- ke produktionsbatches af selengær fra før prioritetsdatoen. forfatterne har således analy- seret to batches af selengær fra cypress systems (fra henholdsvis 1997 og 1999), tre bat- ches af selengær fra pharma nord (fra henholdsvis 1999 og 2000) og én batch af nutrition 21-selengær (fra 1985). forfatterne har desuden analyseret en række tabletter med nutri- tion 21-selengær (fra perioden 1983-1993). for så vidt angår selengærbatchen fra nutriti- on 21 fra 1985 (rågær) gøres der i artiklen en bemærkning om, at denne batch havde væ- ret opbevaret siden 1986 under ”nonoptimum conditions, i.e. varying temperature and humidity”. analyseresultaterne sammenfattes i artiklens tabel 2 og 3: - 53 - • en artikel fra 2004 af margaret rayman, ”review article – the use of high-selenium yeast to raise selenium status: how does it measure up?”. artiklen, der er publiceret efter prioritetsda- toen, indeholder bl.a. følgende tabel, der sammenfatter indholdet af selengærprodukter beskrevet i en række andre artikler: • en artikel fra 2006 af gerhard schrauzer, ”selenium yeast: composition, quality analysis, and safety” (bilag h/ag). artiklen, der er publiceret efter prioritetsdatoen, omtaler indholdet - 54 - af selenmethionin og uorganisk selen i selengærprodukter, bl.a. i (hvad der omtales som) ”genuine se yeast”. af artiklen fremgår nærmere bl.a.: ”… abstract: selenium yeast, produced by growing select strains of saccharomyces cere- visiae in se-rich media, is a recognized source of organic food-form se, but the deter- mination of its exact composition with respect to the se species present produced conflicting results. improved methods of analysis have since revealed it to contain 90+ % of its se in the form of selenomethionine … … inorganic selenium yeast whereas genuine se yeast contains only traces of inorganic se (less than 1 %), “inor- ganic” se yeast preparations with added selenite or selenate where introduced into the market as competitive products during the early years of “organic” se yeast de- velopment and are still offered by some companies. … …” der er herudover fremlagt og under hovedforhandlingen dokumenteret fra følgende bilag (i kronologisk rækkefølge): • en artikel fra 1986 af m. korhola m.fl., ”selenium yeast” (bilag h/ay). • en artikel fra 1986 af m. a. beilstein og p. d. whanger, ”deposition of dietary organic and inorganic selenium in rat erythrocyte proteins” (bilag h/aø). • en artikel fra 1989 af jørgen clausen m.fl., ”biochemical and clinical effects of an antioxida- tive supplementation of geriatric patients” (bilag h/aw). • en artikel fra 1998 af gerhard schrauzer, ”selenomethionine and selenium yeast: appropriate forms of selenium for use in infant formulas and nutritional supplements” (bilag h/ax). • en artikel fra 1998 af h. w. bernhardt, ”centrifugal clarification of molasses” (bilag 15). • en artikel fra 2000 af gerhard schrauzer, ”selenomethionine: a review of its nutritional significance, metabolism and toxicity” (bilag h/am). - 55 - • en artikel fra 2000 af r. lobinski m.fl., ”species-selective determination of selenium com- pounds in biological materials” (bilag h/ap). • en artikel fra 2000 af mihály kotrebai m.fl., ”high-performance liquid chromatography of se- lenium compounds utilizing perfluorinated carboxylic acid ion-pairing agents and inductively coupled plasma and electrospray ionization mass spectrometric detection” (bilag h/aq). • en artikel fra 2000 af á. suhajda m.fl., ”preparation of selenium yeasts l. preparation of sele- nium-enriched saccharomyces cerevisiae” (bilag h/az). • en artikel fra 2000 af clement ip m.fl., ”chemical speciation influences comparative activity of selenium-enriched garlic and yeast in mammary cancer prevention” (bilag h/aå). • en artikel fra 2001 af sven moesgaard og richard morrill, ”the need for speciation to real- ise the potential of selenium in disease prevention” (bilag h/av). • en artikel fra 2001 af gerhard schrauzer, ”nutritional selenium supplements: product types, quality, and safety” (bilag h/aæ). • en artikel fra 2001 af erik larsen m.fl., ”speciation of selenoamino acids, selenonium ions and inorganic selenium by ion exchange hplc with mass spectrometric detection and its application to yeast and algae” (bilag h/bj). • en artikel fra 2003 af gerhard schrauzer, ”facts putting an end to a sel” (bilag h/bc). • en artikel fra 2003 af erik larsen, sven moesgaard m.fl., ”selenium speciation and isotope composition in 77se-enriched yeast using gradient elution hplc separation and icp-dynamic reaction cell-ms” (bilag h/bi). - 56 - • en ”scientific opinion” fra 2008 af european food safety authority (efsa), ”selenium- enriched yeast as a source for selenium added for nutritional purposes in foods for particular nu- tritional uses and foods (including food supplements) for the general population” (bilag h/i
(2)). • en artikel fra 2011 af valeria mapelli m.fl., ”the interplay between sulphur and selenium me- tabolism influences the intracellular redox balance in saccharomyces cerevisiae” (bilag 16). nærmere om lallemands produkter og fremstillingsproces lallemand har fremlagt en række bilag til belysning af indholdet i lallemands selengærpro- dukter og lallemands frems

🔗 Til officiel kilde

AI-forklaring ud fra den officielle lovtekst. Vejledende, erstatter ikke juridisk rådgivning.