Arrête: Art. 1er. Les méthodes d´analyse et de contrôle décrites à l´annexe du présent règlement sont les seules méthodes de référence valables pour l

(68)52 du 11 décembre 1968; Vu l´avis de la Chambre de Commerce du 20 mars 1973; Considérant qu´il y a lieu d´éviter des contestations nées de l´application de techniques d´analyses différentes ou de l´emploi de normes différentes; Considérant qu´en particulier l´harmonisation du contrôle des denrées alimentaires exige la mise en œuvre de techniques identiques ou équivalentes et l´emploi de modes d´expression semblables et le recours à des normes identiques ou équivalentes; Arrête: Art. 1er. Les méthodes d´analyse et de contrôle décrites à l´annexe du présent règlement sont les seules méthodes de référence valables pour les produits et préparations visés par le règlement grandducal du 11 février 1966 relatif au commerce des fécules et poudres pour pudding. Art. 2. Le présent règlement sera publié au Mémorial avec son annexe. Luxembourg, le 29 mars 1973 Le Ministre de la Santé Publique, Camille Ney ANNEXE 1. Détermination de la teneur en humidité Appareillage Une étuve électrique réglable entre 130 et 133° C

(1)et munie d´une ventilation suffisante

(2). 1.

1. Introduire environ 5 g de la denrée dans un pèse-filtre (à fond plat) muni d´un couvercle bouchant bien. Déterminer le poids à 1 mg près. 1.
2. Placer le pèse-filtre contenant l´échantillon à analyser, ouvert dans l´étuve. L´y maintenir pendant 2 h à partir du moment où la température a de nouveau atteint 130° C. Sortir l´échantillon de l´étuve, refroidir dans un exsiccateur et déterminer le poids du pèse-filtre avec couvercle fermé. 1.
3. La perte de poids calculée sur 100 g de denrée constitue la teneur en humidité.
4. Détermination de la teneur en cendres Réactifs: Ethanol 96% vol.

(1)Température de l´air au voisinage des pèse-filtres. L´étuve doit avoir une capacité de chauffe telle qu´après un chauffage préalable à 131° C, elle puisse atteindre à nouveau cette température dans les 45 minutes après introduction du nombre maximum d´échantillons que l´on peut y dessécher en une seule opération.

(2)L´efficacité de la ventilation est contrôlée avec de la semoule de blé dur dont les graines ne dépassent pas 1 mm. La ventilation doit être telle que, lorsque l´opération de dessiccation à 130133° C porte sur le maximum d´échantillon que l´étuve peut contenir, les teneurs en humidité obtenues après 2 et après 3 h ne peuvent pas varier de plus de 0,15%. 777 2.

1. Dans une capsule en platine préalablement calcinée et tarée, peser exactement 5-6g de la denrée. Humecter avec 1-2 ml d´éthanol. 2.
2. Placer la capsule à l´entrée d´un four à mouffle et laisser le four ouvert. Quand le produit ne brûle plus, glisser la capsule plus loin dans le four dont la température est de 900° C. Calciner pendant 2 h sous une amenée d´air suffisante. 2.
3. Sortir la capsule du four et la placer pendant 1 min. sur une plaque d´amiante. Refroidir dans un exsiccateur jusqu´à température ordinaire. Ensuite peser rapidement à 0,1 mg près

(3). 2.

1. La teneur en cendres exprimée en % de la denrée est de: b  a × 100 M dans laquelle: a = le poids en g de la capsule vide b = le poids en g de la capsule avec le résidu de calcination M = le poids en g de la prise d´essai.
2. Filth-test Réactifs: Acide chlorhydrique, 4 n. Ethanol, 96% vol. Ether de pétrole, P.E. 40-60° C. Paraffine liquide Appareillage: Ampoule à décantation, terminée par un corps cylindrique (diamètre 1 cm, longueur 8 cm) au-dessus du robinet. Deux plaques de verre, dont une dotée d´un quadrillage à écartement de 2 mm. Les traits doivent être numérotés. Filtre au kieselgur, Delta n° 325, ou équivalent, diamètre 4 cm. Filtre, SS n° 1575 ou équivalent, diamètre 5 cm. Bande adhésive transparente. 3.
3. Déposer 100 g de l´échantillon dans un vase conique de 1 litre. Ajouter 350 ml d´eau et 50 ml d´acide chlorhydrique. Porter le mélange à ébullition, tout en le remuant, et maintenir l´ébullition pendant 1 heure. Veiller à ce qu´aucun composant solide n´adhère à la paroi du vase, au-dessus du liquide. Laisser refroidir quelque peu. 3.
4. Ajouter 20 ml de paraffine, remuer énergiquement et ajouter de l´eau jusqu´à ce que la couche de paraffine se trouve dans le col du vase. Laisser reposer le vase pendant 15 min. 3.
5. Remplir d´eau le corps cylindrique de l´ampoule à décantation, transvaser la paraffine et une partie du liquide aqueux dans l´ampoule à décantation. Compléter le volume du vase avec de l´eau et transvaser à nouveau dans l´ampoule à décantation. Répéter cette opération jusqu´à ce que toute la paraffine soit passée dans l´ampoule à décantation. Laisser reposer pendant 15 min. 3.
6. Introduire à nouveau 5 ml de paraffine dans le vase et agiter convenablement tout le contenu. Ajouter de l´eau jusqu´à ce que la couche de paraffine se trouve dans le col du vase. Laisser reposer pendant 15 min. 3.
7. Laisser s´écouler l´eau de l´ampoule à décantation tout en veillant à ce que la partie cylindrique reste remplie d´eau. Transvaser ensuite, dans l´ampoule à décantation, la couche de paraffine du vase et une partie de la solution aqueuse.

(3)Les cendres sont hygroscopiques. 778 3.6. Répéter deux fois les opérations 3.4. et 3.5. 3.7. Laisser à nouveau s´écouler la majeure partie de l´eau de l´ampoule à décantation, ajouter 300 ml d´eau. Agiter, puis, après avoir laissé reposer pendant 15 minutes, évacuer la plus grande partie de l´eau. Répéter cette opération jusqu´à ce que l´eau évacuée soit limpide. 3.8. Ajouter 100 ml d´éther de pétrole et 200 ml d´eau. Agiter et, après avoir laissé reposer pendant 15 minutes, évacuer l´eau jusqu´à ce qu´il n´en reste plus que quelques ml. 3.9. Sur un filtre Buchner de 4 cm de diamètre, placer un filtre au kieselguhr surmonté du filtre SS n° 1575. Faire adhérer ce dernier au pourtour de la paroi du Buchner. 3.10. Verser, par fractions de liquide de l´ampoule à décantation sur le filtre et aspirer, en couvrant le Buchner d´un verre de montre. Rincer complètement l´ampoule à décantation à l´eau et verser l´eau de rinçage sur le filtre. Rincer à quatre reprises avec 20 ml d´éthanol. 3.11. Déposer le filtre dans une boîte de Pétri et le sécher à 60° C. Imprégner le filtre par quelques gouttes de paraffine réparties sur la surface. 3.12. Placer le filtre entre les deux plaques de verre, de telle sorte que les traits de la plaque quadrillée soient directement en contact avec le filtre. Fixer les deux plaques de verre à l´aide de bandes transpa- rentes. 3.13. Compter sous faible grossissement les insectes, les acariens, leurs fragments ainsi que les poils de rongeurs, présents sur toute la surface du filtre. 3.14. Exprimer le résultat pour 100 g de matière. 4. Recherche des antiseptiques Liste des réactifs  Ether acidifié: 98 vol. éther + 2 vol. d´acide acétique glacial  Sulfate de sodium anhydre  Solutions témoins: 1% dans l´éthanol  Plaques pour chromatographie en couche mince: mélanger 15 g de Kieselgel G et 15 g de Kieselgur G avec 60 ml d´une solution aqueuse à 0,02% d´Ultraphor. La solution d´Ultraphor W.T. (B.A.S.F.) doit être de préparation récente (conserver dans un flacon brun). Etaler le mélange homogène sur des plaques pour chromatographie sous une épaisseur de 0,25 mm. Sécher les plaques à l´air, puis les activer par chauffage de 30 min. à 110° C.  Phase mobile: mélanger 100 vol. d´éther de pétrole, 40 vol. de chloroforme et 10 vol. d´acide formique.  Cuve de chromatographie: saturée avec le solvant mobile. Révélateurs  Acide benzoïque:

1. a)4,5 ml H2O2 (30%) 4,5 ml d´eau 1 ml solution saturée de Mn SO4
2. b)solution 0,3% Fe SO2  Acide sorbique:
3. a)mélanger 5 vol. d´une solution aqueuse de K2Cr2O7 0,5% + 5 vol. H2SO4 0,3 n
4. b)solution saturée d´acide thiobarbiturique dans l´eau  Acide salicylique: soution de Fe Cl 3 0,1% dans l´eau  Acide déhydroacétique: solution de FeCl3 0,1% dans l´eau  Acide bromacétique
5. a)mélanger 3 vol. de solution de rouge de phénol (24 mg rouge de phénol dans 2,4 ml NaOH 0,1 n, compléter à 100 ml avec acétone) et 1 vol. de solution acétate sodique (6 g d´acétate de sodium + 3 vol. d´acide acétique, compléter à 100 ml avec de l´eau) 779
6. b)solution de chloramine T: dissoudre 25 mg de chloramine T dans 15 ml d´un mélange d´acétoneeau 1:1.  Acide parahydroxybenzoïque et ses esters: réactif de Millon. Dissoudre 10 g mercure dans 10 g acide nitrique fumant. Ajouter 10 à 20 vol. d´eau. Eventuellement, filtrer le dépôt. 4.1. Isolement 4.1.1. Agiter 10 g d´échantillon avec 50 ml d´éther acidifié pendant 3 minutes. 4.1.2. Laisser déposer et décanter prudemment la couche éthérée sur filtre. Procéder de la même façon en prenant 30 puis 20 ml d´éther acidifié. 4.1.3. Réunir les extraits éthérés et sécher avec du sulfate de sodium anhydre. Filtrer. Evaporer jusqu´à 5 ml environ. 4.2. Identification 4.2.1. Sur la ligne de départ de la plaque chromatographique, déposer en traits de 1,5 cm de long 20 µl de la solution obtenue. Déposer de façon identique sur un même trait 10 µl de la solution d´acide benzoïque, 5 µl de la solution d´acide déhydroacétique et 3 µl des autres témoins. 4.2.2. Développer la plaque avec la phase mobile jusqu´à ce que le front de solvant atteigne 15 cm au-dessus de la ligne de départ. Retirer la plaque, laisser sécher à l´air. Développer une deuxième fois de la même manière. 4.2.3. Examiner la plaque sous lumière U.V. (366 nm). Localiser les spots. 4 . 2 . 4 . Révélation des chromatogrammes Acide benzoïque: vaporiser avec la solution a; sécher et vaporiser avec la solution b. L´acide benzoïque donne une tache brune sur fond blanc. Acide sorbique: vaporiser avec le mélange K2Cr2O7 + H2SO4, sécher la plaque à l´étuve, vaporiser la solution d´acide thiobarbiturique, chauffer à nouveau. L´acide sorbique donne une tache rose. Acide salicylique: vaporiser avec la solution de chlorure ferrique. L´acide salicylique donne une coloration violette. Acide déhydroacétique: vaporiser avec la solution de chlorure ferrique. L´acide déhydroacétique donne une coloration jaune sur fond blanc. Acide monobromacétique: exposer la plaque 10 min. à des vapeurs d´ammoniaque; chauffer 10 min. à 100° C pour éliminer l´excès d´ammoniaque. Vaporiser le mélange rouge de phénol, acétate sodique, puis directement la solution de chloramine T. L´acide monobromacétique donne une tache bleue sur fond jaune. Acide p. hydroxybenzoïque et ses esters: vaporiser le réactif de Millon et chauffer à l´étuve. L´acide p. hydroxybenzoïque et ses esters donnent une tache rouge. 4 . 2 . 5 . Remarques générales 1) II est préférable de vaporiser les réactifs en très faible quantité. Si la réaction n´est pas suffisamment nette, chauffer à l´étuve à 100° C. Si nécessaire recommencer la vaporisation, suivie de chauffage une deuxième et même une troisième fois. 2) Vaporiser le réactif spécifique uniquement sur la zone du chromatogramme où peut se trouver l´antiseptique recherché; couvrir le reste de la plaque. 3) Examiner les plaques sous U.V. longueur d´onde 366 nm. 5. Recherche des édulcorants synthétiques Liste des réactifs et produits accessoires  solution saturée de sulfate de sodium  sulfate de sodium anhydre  acétate d´éthyle 780  éthanol p.a. 96%  éthanol-eau 1:1  acide sulfurique 4 n  Solutions d´édulcorants synthétiques: solution de cyclamate: dissoudre 100 mg de cyclamate de soude dans 100 ml du mélange éthanol-eau solution de dulcine: dissoudre 100 mg de dulcine dans 100 ml d´éthanol solution de saccharine: dissoudre 100 mg de saccharine dans 100 ml d´éthanol Plaques pour chromatograhie sur couche mince Dans un mixer mélanger 9 g de cellulose acétylée à 10% (MN 300 Ac Macherey-Nagel & C°) 6 g de poudre de polyamide pour chromatographie sur couche mince (Woelm ou équivalent) avec 60 ml d´éthanol jusqu´à suspension homogène. Etendre une couche de 0,25 mm sur des plaques pour chromatographie. Laisser sécher à l´air puis 10 min. dans une étuve à 70° C. Refroidir les plaques dans un exsiccateur.  Phase mobile: mélanger 45 vol. de Shell sol. A,

(1)6 vol. de n-propanol, 7 vol. d´acide acétique et 2 vol. d´acide formique. A préparer extemporanément. Garnir l´intérieur de la cuvette avec du papier filtre pour favoriser la saturation de l´atmosphère.  Révélateur: dissoudre 200 mg de dichlorofluorescéine dans 100 ml d´éthanol. 5 . 1 . Isolement 5.1.

1. Agiter pendant 3 minutes 3 g de l´échantillon avec 50 ml d´acétate d´éthyle acidifié. 5.1.
2. Laisser déposer et décanter prudemment la solution surnageante sur filtre. Procéder de la même façon avec 30 puis 20 ml d´acétate d´éthyle acidifié. 5.1.
3. Réunir les extraits d´acétate d´éthyle et les sécher avec du sulfate de sodium anhydre. Filtrer et évaporer jusqu´à 4 ml. 5 . 2 . Identification 5.2.
4. Déposer 3 µl de la solution obtenue sur la ligne de départ d´une plaque pour chromatographie sur couche mince. 5.2.
5. Déposer ensuite 2 µl des solutions de cyclamate, de dulcine et de saccharine sur la ligne de départ. 5.2.
6. Eluer la plaque à l´aide de la phase mobile préparée extemporanément jusqu´à ce que la distance entre la ligne de départ et le front atteigne 10 cm. 5.2.
7. Vaporiser le révélateur sur la plaque après évaporation de la phase mobile. 5.2.
8. Examiner le chromatogramme ainsi obtenu à la lumière ultraviolette (254 nm).
9. Colorants L´examen est effectué conformément à la Recommandation M

(65)4 du Comité de Ministres de l´Union économique Benelux relative à l´application d´une méthode de référence Benelux pour la recherche et l´identification des colorants synthétiques, solubles dans l´eau, présents dans les denrées alimen- taires.

1. Degré d´acidité Réactifs:  solution de soude caustique 0,1 n  éthanol 67% vol.  phénolphtaléine: solution éthanolique à 1%. 7.
2. Mélanger pendant 5 minutes 10 g de l´échantillon avec 50 ml d´alcool neutralisé au préalable par la solution NaOH 0,1 n en présence de phénolphtaléine. Filtrer ensuite sur filtre plissé de 15 cm

(1)Le Shell sol. A est un mélange d´hydrocarbures commercialisé par Shell. 781 de diamètre, l´entonnoir étant couvert. Pipeter dès que possible 25 ml du filtrat, les transférer dans un vase conique de 100 ml. Après addition de 3 gouttes de phénolphtaléine, titrer par la solution de NaOH jusqu´à coloration rose. 7.2. Le nombre de ml de la solution de NaOH 0,1 n utilisé, multiplié par 2, donne le degré d´acidité. 8. Nature de l´amidon 8.1. Déposer quelques granulés ou une petite quantité de la denrée à examiner, sur une lame porteobjet. Ajouter une goutte d´eau, mélanger avec une baguette. Recouvrir le mélange d´un couvre-objet et examiner la préparation au microscope. 9. Dosage du sulfite dans l´amidon de maïs Réactifs:  Méthanol  Azote en bonbonne  Eau oxygénée 3% p/p (fraîchement préparée)  Acide chlorhydrique 4n  Bleu de bromo-phénol 0,1% (p/

1. v)dans 20% (v/
2. v)d´éthanol  Solution d´hydroxyde de sodium 0,1000 n  Solution de chlorure de baryum 0,01 M  Solution tampon: dissoudre 10 g du complexe magnésium EDTA dipotassique dans 200 ml d´eau et mélanger avec une solution de 70g de chlorure d´ammonium dans 1800 ml d´ammoniaque 25% (p/
3. p)(EDTA = éthylène diamine N.N´-tétra acétique)  Solution EDTA 0,0200 M; dissoudre 7,444 g de sel disodique de EDTA dans de l´eau et compléter à 1000 ml. Soit le titre tk.  Solution de Noir d´Eriochrome-T: dissoudre 0,5 g de noir d´Eriochrome-T et 4,5 g de chlorhydrate d´hydroxylamine dans 100 ml d´éthanol à 96% (v/
4. v)(Cette solution se conserve pendant trois semaines). Appareillage Appareil de distillation du SO2 constitué de 5 parties. A est un ballon de 1 litre comportant deux cols rodés B 34. D est un récipient de 25 ml; le gaz peut s´échapper par un bulbe perforé. La pièce de connexion E est pourvue de parties rodées B 12,5 et B 19. Toutes les pièces rôdées sont rendues étanches à l´aide de graisse de silicone et verrouillées par des ressorts. Plaque chauffante électrique avec agitateur magnétique. 9.1. Dans le ballon, déposer un petit agitateur magnétique, quelques grains de pierre ponce et 50 ml de méthanol. Pendant 15 min., au moins, faire passer dans tout l´appareil un courant régulier d´azote d´environ 100 ml/min. A l´aide d´un cylindre gradué, introduire 10 ml d´eau oxygénée dans le récipientcollecteur (D). 9.2. Dans un bécher de 600 ml, peser, à 0,1 g prés, 100 g de la denrée. Ajouter 100 ml de méthanol et remuer jusqu´à obtenir une suspension homogène. Sans interrompre le courant de gaz, introduire cette suspension dans le ballon par l´entonnoir doseur. Laver à plusieurs reprises le bécher et l´entonnoir à l´aide de 75 ml de méthanol et de 50 ml d´eau distillée au total. Tenir la suspension en mouvement au moyen de l´agitateur magnétique. Ajouter ensuite par l´entonnoir doseur 40 ml d´acide chlorhydrique et mettre en marche le réfrigérant. Chauffer le ballon de telle sorte que son contenu soit fortement et régulièrement en ébullition. Poursuivre l´ébullition pendant une heure tout en introduisant constamment du gaz. 9.3. Transférer le contenu du récipient-collecteur quantitativement avec un peu d´eau distillée dans un vase conique de 300 ml. Faire bouillir le contenu du vase conique pendant 15 min. 782 Après refroidissement, ajouter trois gouttes de bleu de bromo-phénol et titré à l´aide de la solution d´hydroxyde de sodium (nombre de ml utilisés = a). Après 15 min d´ébullition et refroidissement, effectuer une titration à blanc de 10 ml. d´eau oxygénée (nombre de ml utilisés = b). 9.4. Faire bouillir pendant 5 minutes la solution obtenue après la titration alcalimétrique; à l´aide d´une pipette, ajouter 10,00 ml de la solution de chlorure de baryum au liquide bouillant. Poursuivre l´ébullition pendant une minute encore et placer le ballon pendant 1 heure au bain-marie bouillant. Refroidir et ajouter de l´eau jusqu´à ce que le volume atteigne environ 100 ml. 9.5. Ajouter successivement 4 ml de solution tampon, 0,5 ml d´acide chlorhydrique et 7 gouttes de noir Eriochrome-T. Titrer immédiatement avec la solution EDTA à l´aide d´une microburette jusqu´à ce que le liquide soit d´un bleu pur. (Nombre de ml utilisés = c). Exécuter une titration à blanc de 10 ml de chlorure de baryum. (Nombre de ml utilisés = d). 9.6. Calculer la teneur en sulfite G de la denrée, à l´aide de la titration alcalimétrique par la formule: (a  b). t. 32.1000 G= mg SO2 /kg g ou à l´aide de la titration complexo-métrique, par la formule: (d c). t k .64.1000 G= mg SO2 /kg g t2 . . titre de la solution d´hydroxyde de sodium tk . . titre de la solution EDTA 10. Examen microbiologique 10.1. Moisissures Cette méthode fera l´objet d´un complément à la présente Recommandation. 783 Règlement ministériel du 6 avril 1973 fixant les méthodes d´analyse de référence des épices et des produits à base d´épices. Le Ministre de la Santé Publique, Vu l´article 12 du règlement grand-ducal du 22 octobre 1970 relatif aux épices et aux produits à base d´épices; Vu la Décision du Comité de Ministres de l´Union Economique Benelux M

(72)11 du 11 avril 1972; Vu l´avis de la Chambre de Commerce du 4 avril 1973; Vu l´avis de la Chambre des Métiers du 19 mars 1973; Considérant qu´il y a lieu d´éviter des contestations nées de l´application de techniques d´analyses différentes ou de l´emploi de normes différentes; Considérant qu´en particulier l´harmonisation du contrôle des denrées alimentaires exige la mise en œ uvre de techniques identiques ou équivalentes et l´emploi de modes d´expression semblables et le recours à des normes identiques ou équivalentes; Arrête: Art. 1er. Les méthodes d´analyse et de contrôle décrites à l´annexe du présent règlement sont les seules méthodes de référence valables pour les produits et préparations visés par le règlement grandducal du 22 octobre 1970 relatif aux épices et aux produits à base d´épices. Art. 2. Le présent règlement sera publié au Mémorial avec son annexe. Luxembourg, le 6 avril 1973 Le Ministre de la Santé Publique, Camille Ney ANNEXE 1. 1.1. 1.2. PREPARATION DE L´ECHANTILLON L´échantillon d´épices moulues peut être utilisé sans préparation. Afin de réduire le produit au degré de finesse convenable, le moudre dans un moulin approprié, par exemple un moulin à café électrique, en l´échauffant le moins possible. Après la mouture, transférer immédiatement tout l´échantillon moulu dans un flacon à fermeture 2.1. hermétique. MATIERES MINERALES Réactifs Acide sulfurique p.s. 1,84. Carbonate d´ammonium solide. Calciner une capsule de porcelaine ou de platine, laisser refroidir dans un exsiccateur et peser 2.2. exactement jusqu´à 0,1 mg (W0g). Dans la capsule peser exactement 2 à 5 g de l´échantillon préparé selon 1. (le poids de l´échan- 2.   tillon + la capsule = W1g). 2.3. 2.4. 2.5. 2.6. 2.7. Humidifier par quelques gouttes d´eau et mélanger avec 1 ml d´acide sulfurique. Chasser l´eau et l´excès d´acide sulfurique par un chauffage modéré et calciner. Si les cendres contiennent encore des parcelles de carbone, répéter cette opération avec quelques gouttes d´acide sulfurique. Laisser refroidir. Ajouter un peu de carbonate d´ammonium et calciner à nouveau. Laisser refroidir dans un exsiccateur et peser exactement à 0,1 mg près (W2g). Calculer la teneur en cendres sulfatées (A), en pour-cent, par la formule: 784 W2  W 0 × 100 W1  W0 La teneur en matières minérales en pour-cent est égale à 0,8 x A. A = 3. SABLE  3.1. 3.2. 3.3. 3.4. 3.5. 4. Réactif Acide chlorhydrique 4 n. Ajouter 25 ml d´acide chlorhydrique aux cendres sulfatées obtenues selon 2. Recouvrir la capsule d´un verre de montre, faire bouillir, prudemment pendant 10 minutes et laisser refroidir. Filtrer le résidu sur un filtre sans cendres. Laver à l´eau chaude jusqu´à disparition de la réaction acide. Incinérer le filtre puis calciner. Laisser refroidir dans un exsiccateur et peser. Répéter la calcination et le refroidissement jusqu´à ce que la différence entre deux pesées successives soit inférieure à 1 mg (W3g). Calculer la teneur en sable (Z) en pour-cent, par la formule: W3  W0 Z = × 100 W1  W0 CELLULOSE BRUTE Réactifs  Acide chlorhydrique 0,3 n  Acide sulfurique 0,3 n  Solution d´hydroxyde de sodium 1,5 n    4.1. 4.2. Acétone P.E. 56-57° C. Ether de pétrole, P.E. 40-60° C. Sable purifié. Utiliser du sable dont la granulométrie est comprise entre 0,15 et 0,30 mm. Laisser le sable macérer pendant quelques jours, dans l´acide chlorhydrique (p.s. 1,15). Laver à l´eau jusqu´à ce que l´eau de lavage ne présente plus de réaction acide. Sécher le sable en l´étalant et en le chauffant ensuite à 700° C pendant une heure au moins. Appareils et accessoires Béchers de 250 à 400 ml avec condenseurs appropriés. Creusets filtrants de quartz ou de porcelaine; diamètre moyen des pores de 90 à 150 microns, hauteur de préférence 40 mm environ, diamètre inférieur environ 30 mm, diamètre supérieur, environ 40 mm (p. ex. Jena 1 bBI). Capsules pour calcination d´un diamètre d´environ 50 mm. Four à moufle électrique bien ventilé, pourvu d´un instrument approprié pour mesurer la température (par ex. un pyromètre) et d´un thermostat automatique permettant de maintenir la température du four entre 680 et 720° C. Etuve électrique bien ventilée, pourvue d´un thermostat automatique permettant de maintenir la température de l´étuve à 140° C plus ou moins 2°, Exsiccateur à gel de silice coloré en bleu, pourvu d´une plaque de métal perforée de 2 à 3 mm d´épaisseur afin d´accélérer le refroidissement des creusets. Appareil d´extraction de Soxhlet. Cartouche en papier filtre durci. Dans la cartouche peser, exactement à 0,1 mg près un gramme environ du produit moulu (W0g). Extraire au Soxhlet par l´éther de pétrole pendant une heure au moins. Transférer quantitativement le contenu de la cartouche dans un bêcher. 785 4.3. 4.4, 4.5. 4.6. 5. 5.1. 5.2. Ajouter 50 ml d´acide sulfurique et porter rapidement à l´ébullition. Couvrir du condenseur et laisser bouillir doucement pendant une demi-heure. Ajouter ensuite 25 ml de la solution d´hydroxyde de sodium et faire à nouveau bouillir pendant une demi-heure, sous condenseur. Filtrer sur le creuset filtrant, dont le tiers environ est rempli de sable. Laver à cinq reprises, chaque fois avec environ 10 ml d´eau bouillante, puis une fois avec 50 ml d´acide chlorhydrique, puis à nouveau à cinq reprises, chaque fois avec environ 10 ml d´eau bouillante, et enfin avec 50 ml d´acétone. Placer le creuset et son contenu dans la capsule pour calcination et sécher pendant une heure et demie dans l´étuve à 140° C. Placer le tout dans l´exsiccateur, laisser refroidir pendant une heure et demie et peser exactement jusqu´à 0,1 mg (W1g le poids de la capsule et du creuset avec son contenu). Placer l´ensemble dans le four à moufle préalablement porté à température et calciner pendant une heure à 700° C. Ensuite, laisser refroidir la capsule et le creuset pendant 5 minutes sur une plaque d´amiante, puis les porter dans l´exsiccateur. Après deux heures, peser exactement à 0,1 mg près (W 2g). Calculer la teneur en cellulose brute (RV), en pour-cent, par la formule: W1  W 2 R.V. = × 100 W0 HUILES ESSENTIELLES Réactifs  Xylène, P.E. 136-140° C.  Glycérol Appareil Appareil pour doser les huiles essentielles dans les épices. L´appareil se compose d´un ballon à fond rond d´un litre avec col rôdé, relié à un montage comportant un tube gradué et étalloné ainsi qu´un réfrigérant et un tube capillaire. Ce tube gradué permet de mesurer un volume de 0,5 ml avec une précision de 0,01 ml. Sous le tube gradué se trouve un renflement surmontant le robinet A, qui permet d´évacuer le contenu du tube ou de le mettre en communication avec le tube capillaire. Le tube capillaire est pourvu d´une chambre d´expansion. En B se trouve une pièce rôdée dotée d´un bouchon de verre. Si le réfrigérant contient encore des huiles essentielles après la distillation, celles-ci peuvent être rassemblées dans le tube gradué avec le reste de la phase non aqueuse, en injectant de l´eau distillée par cette ouverture B. L´appareil doit être soigneusement nettoyé, en le rinçant avec de l´éthanol et de l´éther, en le dégraissant avec de l´acide chromique plus en le lavant à l´eau distillée jusqu´à disparition de la réaction acide. Introduire dans le ballon de l´appareil la quantité de l´échantillon indiquée au tableau I (W g). Y ajouter la quantité de liquide de distillation indiquée au tableau, déposer dans le ballon un agitateur magnétique recouvert de teflon et connecter le ballon. Remplir le tube gradué jusqu´au trait supérieur à l´aide d´eau distillée. Le robinet A est en position 1-2. Ajouter environ 0,2 ml de xylène dans le tube gradué. Tourner le robinet A en position 1-3, et évacuer l´eau du tube gradué de telle sorte que le xylène se situe dans l´échelle graduée. Noter avec précision le volume du xylène (Vx

1. ml)et tourner prudemment le robinet A jusqu´à la position 1-2. 786 5.3. Placer le ballon dans un bain de paraffine ou d´huile. Utiliser comme source de chaleur une plaque chauffante, dotée d´un agitateur magnétique fort et d´une connection à un thermomètre à contact. Régler la température du bain (± 130° C, thermomètre à contact), de telle sorte que la distillation s´effectue lentement et régulièrement dans les délais prévus au tableau I. Agiter le contenu du ballon pendant la distillation. 5.4. Attendre au moins 15 minutes après l´interruption de la distillation et, en mettant prudemment le robinet A en position 1-3, amener la phase non aqueuse dans la partie graduée du tube. Noter le volume de la couche non aqueuse dans le tube gradué (V0 ml). (*) 5.5. Exprimer en % de poids (m/
2. m)la teneur en huiles essentielles (O) du produit par la formule: 100 . (V 0  V x ) . d O= W où: V x = le volume en millilitres du xylène ajouté V0 = le volume, après distillation, de la couche non aqueuse d = le poids spécifique moyen des huiles essentielles de l´épice considérée (tableau II). W = poids de l´échantillon 6. EXTRAIT ETHERE, NON VOLATIL .6.1 Extrait éthéré total Réactifs  Ether sec exempt de peroxydes  Pentoxyde de phosphore, agent déshydratant  Sable lavé à l´acide chlorhydrique et séché. 6.1.1. Peser exactement et mélanger avec une quantité quintuple de sable 3 à 10 g de l´échantillon préparé selon 1. Transférer quantitativement le mélange dans une cartouche de papier faisant partie d´un appareil d´extraction Soxhlet. Placer la cartouche dans l´appareil d´extraction et extraire pendant 10 heures à l´aide d´éther. 6.1.2. Evaporer l´éther à la température de 40°C, Sécher le résidu en plaçant dans le ballon un tube rempli de pentoxyde de phosphore. Peser le résidu séché. 6.2. 7. Extrait éthéré non volatil Calculer l´extrait éthéré non volatil comme la différence entre l´extrait éthéré total déterminé selon 6.1. et la teneur en huile volatile déterminée selon 5., les deux valeurs étant exprimées en gramme par 100 g. FILTH-TEST Réactifs Acide chlorhydrique, 4 n Ethanol, 96% vol. Ether de pétrole, P.E. 40-60° C. Paraffine liquide (*) Une partie des matières volatiles de la noix de muscade se cristallise dans le réfrigérant. Recueillir cette cristallisation et la couche non aqueuse en fermant le robinet A et en injectant prudemment de l´eau distillée dans le tube réfrigérant par l´ouverture B, La couche de xylène surnageante monte avec le niveau de l´eau et entre en contact avec la matière cristallisée. Ouvrir prudemment le robinet. A et admettre à nouveau la phase non aqueuse dans la partie graduée du tube. Répéter cette opération jusqu´à ce que le réfrigérant ne contienne plus de matière cristallisée. Alors seulement, noter le volume de la couche non aqueuse. 787 7.1. 7.2. 7.3. 7.4. 7.5. 7.6. 7.7. 7.8. 7.9. 7.10. 7.11. 7.12. 7.13. 7.14. 8. Appareillage Ampoule à décantation, terminée par un corps cylindrique (diamètre 1 cm, longueur 8
3. cm)audessus du robinet. Deux plaques de verre, dont une dotée d´un quadrillage de 2 mm de côté, Les traits doivent être numérotés. Filtre au kieselguhr, Delta n° 325 ou équivalent, diamètre 4 cm. Filtre, SS n° 1575 ou équivalent, diamètre 5 cm. Bande adhésive transparente. Déposer 25 g de l´échantillon préparé selon 1. dans un vase conique de 1 litre. Ajouter 350 ml d´eau et 50 ml d´acide chlorhydrique. Porter le mélange à l´ébullition, tout en le remuant, et maintenir l´ébullition pendant 1 heure. Veiller à ce qu´aucun composant solide n´adhère à la paroi du vase, au-dessus du liquide. Laisser refroidir quelque peu. Ajouter 20 ml de paraffine, remuer énergiquement et ajouter de l´eau jusqu´à ce que la couche de paraffine se trouve dans le col du vase. Laisser reposer le vase pendant 15 minutes. Remplir d´eau le corps cylindrique de l´ampoule à décantation, transvaser la paraffine et une partie du liquide aqueux dans l´ampoule à décantation. Compléter le volume du vase avec de l´eau et transvaser à nouveau dans l´ampoule à décantation. Répéter cette opération jusqu´à ce que toute la paraffine soit passée dans l´ampoule à décantation. Laisser reposer pendant 15 min. Introduire à nouveau 5 ml de paraffine dans le vase et agiter convenablement tout le contenu. Ajouter de l´eau jusqu´à ce que la couche de paraffine se trouve dans le col du vase. Laisser reposer pendant 15 minutes. Laisser s´écouler l´eau de l´ampoule à décantation tout en veillant à ce que la partie cylindrique reste remplie d´eau. Transvaser ensuite, dans l´ampoule à décantation, la couche de paraffine du vase et une partie de la solution acqueuse. Répéter deux fois les opérations 7.4. et 7.5. Laisser à nouveau s´écouler la majeure partie de l´eau de l´ampoule à décantation, ajouter 300 ml d´eau. Agiter, puis, après avoir laissé reposer pendant 15 minutes, évacuer la plus grande partie de l´eau. Répéter cette opération jusqu´à ce que l´eau évacuée soit limpide. Ajouter 200 ml d´éther de pétrole et 200 ml d´eau. Agiter et, après avoir laissé reposer pendant 15 minutes, évacuer l´eau jusqu´à ce qu´il ne reste plus que quelques millilitres. Sur un filtre Buchner de 4 cm de diamètre, placer un filtre au kieselguhr surmonté du filtre SS n° 1575. Faire adhérer ce dernier au pourtour de la paroi du Buchner. Verser, par fractions, le liquide de l´ampoule à décantation sur le filtre et aspirer, en couvrant le Buchner d´un verre de montre. Si le liquide passe mal à travers le filtre, ajouter davantage d´éther de pétrole à l´ampoule à décantation. Rincer complètement l´ampoule à décantation à l´eau et verser l´eau de rinçage sur le filtre. Rincer à quatre reprises avec 20 ml d´éthanol. Déposer le filtre dans une boîte de Pétri et le sécher à 60° C. Imprégner le filtre par quelques gouttes de paraffine réparties sur la surface. Placer le filtre entre les deux plaques de verre, de telle sorte que les traits de la plaque quadrillée soient directement en contact avec le filtre. Fixer les deux plaques de verre à l´aide de bandes adhésives transparentes. Compter sous faible grossissement les insectes, les acariens, leurs fragments ainsi que le poil de rongeur, présents sur toute la surface du filtre. Exprimer le résultat par rapport aux 25 g de matière examinée. COLORANTS Cet examen est effectué conformément aux dispositions nationales des trois pays adaptées aux Recommandations du Comité de Ministres du 31 mars 1965, M

(65)4, et du 17 octobre 1966, M

(66)14, relatives à l´application de méthodes de référence Benelux pour la recherche et l´iden- 788 tification respectivement des colorants synthétiques solubles dans l´eau et des colorants liposolubles, présents dans les denrées alimentaires. 9. RECHERCHE DE L´HELIOTROPINE (= PIPERONAL) DANS LA VANILLE Appareillage Plaques (20 x 20

1. cm)avec silicagel G pour chromatographie en couche mince, épaisseur 0,25 mm. Sécher les plaques à l´air, puis pendant deux heures dans une étuve à 110° C. Après refroidissement à la température ambiante, conserver jusqu´au moment de l´utilisation dans un exsiccateur contenant du silicagel. Cuve de développement pour chromatographie en couche mince. La paroi des cuves est recouverte de papier filtre. Dans le fond, se trouve une couche de phases mobile de 1 cm d´épaisseur. La cuve est conditionnée en une heure. Réactifs Ethanol 96% (v/
2. v)Ether pro analysi (p.a.) Phase mobile I: 80 vol. d´hexane n+ 20 vol. d´acétate d´éthyle Phase mobile II: 97 vol. de benzène + 3 vol. d´acétate d´éhtyle Révélateur A: solution saturée de sulfate d´hydrazine dans de l´acide chlorhydrique 1 n Révélateur B: solution à 5% (m/
3. m)d´hydroxyde de potassium dans du méthanol Révélateur C: solution saturée d´acide phosphomolybdique dans de l´éthanol 96% (v/v). Solutions de référence 0,5 g de vanilline dans 100 ml d´éthanol 96% (v/
4. v)0,5 g d´éthyl-vanilline dans 100 ml d´éthanol 96% (v/
5. v)0,5 g de p-hydroxybenzaldéhyde dans 100 ml d´éthanol 96% (v/
6. v)0,5 g de coumarine dans 100 ml d´éthanol 96% (v/
7. v)0,5 g de piperonal = héliotropine dans 100 ml d´éthanol 96% (v/
8. v)0,5 g de vanitrope (2-éthoxy-4(propényl-1)phénol) dans 100 ml d´éthanol 96% (v/v). 9.1. Mode opératoire 9.1.1. Dans un mortier, triturer de 2-5 g de vanille avec 20 g de sable sec. Ajouter 15 ml d´éthanol 96% (v/v), bien mélanger et évaporer l´éthanol dans un évaporateur rotatif. 9.1.2. Dans le ballon d´évaporation, agiter la matière sèche obtenue avec 50 ml d´éther (p.a.) puis filtrer. Laver le filtre et la matière extraite à l´aide de 50 ml d´éther. 9.1.3. Dans un évaporateur à rotation, évaporer à sec l´extrait obtenu et le reprendre par de l´éthanol p.a. de telle sorte qu´1 ml de solution d´extrait corresponde environ à 1 g de vanille. 9.2. Chromatographie en couche mince 9.2.1. Sur quatre plaques pour chromatrogaphie en couche mince (silicagel G, épaisseur de la couche 0,25
9. mm)de 20 x 20 cm, indiquer les points de départ sur une ligne à 2 cm du bord inférieur. Tracer une ligne indiquant le front de solvant à 15 cm des sept points de départ. 9.2.2. Sur les deux points de départ centraux, déposer respectivement 2 Ml et 10 Ml de l´extrait obtenu selon 9.1.3. Sur les autres points de départ, déposer respectivement 2 Ml de l´une des six solutions de référence. Laisser sécher. Le diamètre des taches ne peut pas excéder 0,5 cm. Répéter ces opérations sur les trois autres plaques. 789 9.2.3. Placer trois plaques dans la cuve contenant la phase mobile I et une plaque dans la cuve contenant la phase mobile II. Chromatographier jusqu´à ce que le solvant mobile ait atteint la ligne supérieure. Retirer les plaques des cuves et sécher à l´air. 9.2.4. Sur les trois plaques développées dans la phase mobile I, vaporiser respectivement les révélateurs A, B et C. Laisser sécher à l´air les plaques vaporisées avec les révélateurs A et B. Sécher à 100° C la plaque vaporisée avec le révélateur C. Vaporiser le révélateur A sur la plaque développée dans la phase mobile II et la laisser sécher à l´air. 9.3. Examen Comparer les taches obtenues de l´échantillon avec celles des substances de référence. Comparer également sous lumière U.V. à 366 nm. 9.4. Remarque Les substances de référence peuvent être choisies en fonction du problème posé. Il est nécessaire de toujours utiliser la vanilline comme substance de référence. TABLEAU I Aperçu des conditions de distillation des huiles essentielles d´épices matières premières anis ou graines d´anis macis cannelle de Ceylan cannelle cumin ou graines de cumin clous de girofle noix de muscade poivre noir poivre blanc piment fenouil séché ou graines de fenouil cardamome quantités en g 10 10 20 20 20 1,5-2 3 15 15 2 10 5 liquide de distillation état entier entier moulue moulue moulu broyés moulue moulu moulu broyés entier graines durée de la distillation xx ml en h ge ge e e e e e e e e ge ge 50 50 200 200 200 18-25 40 150 150 25 50 25 4 4 5 5 5 4 5 5 5 4 4 5 entières xx g = glycérole; ge = mélange à parties égales de glycérol et d´eau; e = eau. 790 TABLEAU II Poids spécifiques des huiles essentielles des épices et aperçu des exigences imposées dans le règlement M

(68)16 aux huiles essentielles et à l´extrait éthéré non volatil des épices matières premières anis ou graines d´anis macis cannelle de Ceylan cannelle cumin ou graine de cumin clous de girofle noix de muscade poivre noir poivre blanc piment fenouil ou graines de fenouil cardamome huile ess. en % extrait éthéré non volatil p. s. moyen à (au moins) (au moins) 15° C 2 4 1,5 1 2 12          25 6 6 0,98 0,91 1,01 1,06 0,91 1,06 0,90 0,90 2 3 2    Imprimerie de la Cour Victor BUCK, s. à r. I., Luxembourg  1,04 0,97 0,93