NORMĂ*) din 14 iunie 2005 de metrologie legală NML 034-05 "Gazcromatografe și lichidcromatografe" Publicat în MONITORUL OFICIAL nr. 664 bis din 26 iulie 2005 Notă ... *) Aprobată prin ORDINUL nr. 117 din 14 iunie 2005, publicat în MONITORUL OFICIAL nr. 664 din 26 iulie 2005. 1. Domeniu de aplicare Prezenta normă de metrologie legală se referă la gazcromatografele (GC) și lichidcromatografele de înaltă performanță (HPLC), care se folosesc la măsurările concentrațiilor substanțelor gazoase, lichide sau solide efectuate în activități de urmărire a stării de sănătate, diagnosticare sau tratament, în activitatea de preparare și certificare a medicamentelor, în activitatea laboratoarelor de analize medicale și farmaceutice, în cadrul unor expertize solicitate de instanțele judecătorești, în domeniul supravegherii și protecției mediului. ... 2. Terminologie În prezenta normă de metrologie legală termenii specifici utilizați au următoarele semnificații: 2.1. cromatografie - tehnica folosită pentru separarea componenților unei probe, prin care acești componenți se distribuie între două faze, una staționară și una mobilă. Faza staționară poate fi un solid sau un lichid depus pe suport; ... 2.2. coloana cromatografică - un tub care conține faza staționară prin care trece faza mobilă; ... 2.3. faza mobilă - ansamblul format din gazul purtător și porțiunea din eșantionul introdus în coloana (GC); un lichid (solvent) folosit pentru eluarea componenților probei prin coloană sau după coloană. Poate fi monocomponent sau un amestec de solvenți (HPLC); ... 2.4. faza staționara - un lichid relativ nevolatil, absorbant (la temperatura de lucru) sau solid absorbant depus sau nu pe un suport solid care produce separarea constituenților unei probe datorită diferențelor de solubilitate și respectiv, de adsorbție (GC); material imobil activ existent în coloană, depus pe suportul solid sau fiind însuși suportul solid, care produce o întârziere în trecerea componenților probei, ca urmare a proceselor specifice de separare cromatografică (HPLC); ... 2.5. eluție - extragerea și deplasarea constituenților unei probe din faza staționară de către faza mobilă; ... 2.6. dispozitiv de injecție - mijloc tehnic de introducere a probei în coloana cromatografică; ... 2.7. detector - dispozitiv care permite conversia concentrațiilor componenților probei în semnal electric proporțional; ... 2.8. cromatograma - un grafic al răspunsului electric al detectorului funcție de timp. Din cromatogramă se obțin următorii parametri de reținere: timpul de reținere [t(R)], precum și înălțimea (
- h)sau aria (A) picurilor (vârfurilor cromatografice) componenților separați; pe baza acestor parametri se identifică și se determină cantitativ componenții probei; ... 2.9. analiza calitativă: identificarea unui compus prin cromatografie, cu ajutorul unor etaloane, pe baza parametrilor de reținere [t(R)]; ... 2.10. analiza cantitativă - calcularea concentrațiilor compușilor chimici sau a compoziției probei din datele picurilor componenților (arie, înălțime) și ale componenților de referință; ... 2.11. zgomot de fond - măsură a variației semnalului de ieșire al unui detector în situația în care nu se înregistrează prezența unui component al probei; ... 2.12. limita de detecție - concentrația componentului de interes al probei care dă un semnal de ieșire al detectorului, egal (de regulă) cu de trei ori zgomotul de fond; ... 2.13. selectivitate - caracteristica unui detector de a reacționa într-un grad înalt la anumite categorii de compuși față de altele; ... 2.14. sensibilitatea unui detector - semnalul produs de unitatea masică a compușilor într-un gaz purtător, care se încadrează intr-una din categoriile următoare: – pentru un detector dependent de concentrație, ea se exprimă în A x ml x g-^1 sau V x ml x g prin ecuația: ... S = P x F/M unde S - Sensibilitatea; P - Aria integrată a picului (A x s sau V x s); F - Debitul gazului purtător (ml/s); M - Masa eșantionului în gazul purtător (
- g)– pentru un detector dependent de debitul masic, sensibilitatea se exprimă în A x s x g-^1 sau V x s x g-^1 prin ecuația: ... S = P/M unde simbolurile sunt aceleași ca la definiția de mai sus. ... 2.15. timp de reținere - intervalul de timp scurs de la injectarea probei până la înregistrarea valorii maxime a picului componentului din probă; ... 2.16. domeniu liniar al detectorului - domeniul concentrațiilor sau al debitelor masice pentru un component de interes al probei, pentru care sensibilitatea detectorului rămâne constantă într-o plajă de 5%. Valoarea sa este dată de raportul dintre limita superioară a liniarității și limita de detecție; ... 2.17. domeniu dinamic al detectorului - domeniul concentrațiilor sau al debitelor masice ale unui component al probei, pentru care o modificare a cantității de probă produce o modificare măsurabilă a semnalului de ieșire al detectorului; ... 2.18. repetabilitate - limita de acceptabilitate pentru rezultatele măsurărilor succesive efectuate asupra aceluiași măsurand, în aceleași condiții de lucru, de către același operator și în cursul unei perioade relativ scurte de timp. ... 2.19. Detectori utilizați în GC: 2.19.1. Detector cu ionizare în flacără (FID) - detector care este dependent de debitul masic, neselectiv, larg aplicabil la analiza compușilor organici și anorganici; ... 2.19.2. Detector cu captura de electroni (ECD) - detector dependent de concentrație, selectiv pentru compușii halogenați; ... 2.19.3. Detector flam-fotometric (FPD) - detector dependent de debitul masic, selectiv pentru compușii care conțin fosfor și sulf; ... 2.19.4. Detector termoionic (TID) - detector dependent de debitul masic, selectiv pentru compușii care conțin fosfor și azot; ... 2.19.5. Detector cu conductivitate electrolitică (ELCD) - detector dependent de debitul masic, selectiv pentru compușii care conțin azot și sulf; ... 2.19.6. Detector cu fotoionizare (PID) - detector dependent de concentrație, selectiv în funcție de energia lămpii, cu largi aplicații la compuși organici și anorganici; ... 2.19.7. Detector cu conductibilitate termica (TCD) - detector dependent de concentrație, cu aplicații la analiza gazelor organice și anorganice; ... 2.19.8. Detector selectiv de masă (MS) este parte componentă a sistemului GC/MS care combină tehnica separării cromatografice cu detecția printr-un spectrometru de masă. ... ... 2.20. Detectori utilizati în HPLC: 2.20.1. Detector UV/vizibil - detector care măsoară absorbantă luminii prin probă; ... 2.20.2. Detector cu fluorescenta - detector care utilizează relația dintre emisia fluorescentă și concentrația compușilor probei care au fost excitați prin absorbția luminii; ... 2.20.3. Detectori electrochimici - detectori care pot fi folosiți pentru măsurarea componenților probei care se pot oxida sau reduce electrochimic la electrozi; ... 2.20.4. Detector selectiv de masă (MS) - conform descrierii de la punctul 2.19.8; ... 2.20.5. Detector cu indice de refracție - detector care poate fi folosit pentru măsurarea concentrațiilor unor probe pe baza diferenței indicilor de refracție între soluții. ... ... ... 3. Cerințele metrologice și tehnice 3.1. Cerințe metrologice 3.1.1. Condiții nominale de funcționare Valorile nominale ale condițiilor de funcționare trebuie specificate de producător după cum urmează: 3.1.1.1. Condițiile de mediu climatic, mecanic și electromagnetic sunt condițiile de laborator prevăzute la pct 3.1.2.1 ... 3.1.1.2. Pentru mărimile de influență ale alimentării cu energie electrică: – limitele domeniilor de tensiune și frecvența în curent alternativ (220 + 10/-15%, V; 50 ±1%, Hz); ... – limitele domeniilor de tensiune ale alimentării în curent continuu (declarate de producător). ... ... 3.1.1.3. Pentru presiunea ambiantă: valorile minime și maxime ale presiunii ambiante. ... ... 3.1.2. Cerințele metrologice pentru GC 3.1.2.1. În timpul evaluărilor pentru obținerea aprobării de model și a verificărilor metrologice ulterioare, sistemul GC trebuie verificat în condiții de laborator folosind materiale de referință și în condițiile de referință de mai jos: – temperatura ambiantă: (23 ±3)°C, cu o stabilitate de ±3°C în timpul măsurărilor; ... – umiditate relativă: (30 ... 80)%; ... – dispozitivul de injectie, coloana/coloanele, debitul gazului purtător și temperaturile corespund specificațiilor producătorului sau utilizării specifice pentru care este configurat sistemul gaz-cromatografic. ... Funcție de utilizarea specifică preconizată se vor stabili la verificări: – tipul gazului purtător; ... – tipul de injector; ... – tipul detectorului; ... – tipul coloanei/coloanelor. ... ... 3.1.2.2. Repetabilitatea, care se determina ca abatere standard pentru fiecare pic cromatografic caracteristic unui amestec etalon de concentrație de gaze sau unei solutii de referința, trebuie să indeplineasca urmatoarele condiții de performanță: – maximum 5% pentru ariile sau inaltimile picurilor, respectiv pentru concentratiile calculate; ... – maximum 1% pentru timpul de retinere. ... ... 3.1.2.3. Limitele de detectie și domeniul liniar al detectorului/detectorilor folositi în sistemul GC trebuie să satisfaca cerințele de performante specificate de producător pentru compusii de incercare relevanti. În tabelul 1 Tabelul 1 Caracteristici metrologice ale detectorilor utilizati de GC ... ... 3.1.3. Cerințele metrologice pentru sistemul GC/MS 3.1.3.1. În timpul evaluarilor, sistemul GC/MS trebuie să lucreze în condițiile de referința menționate la punctul 3.1.2.1 Suplimentar, producătorul trebuie să specifice tipul sursei de ionizare și timpul de scanare. ... 3.1.3.2. Trebuie să se efectueze o verificare pentru evaluarea bazei de date privind compusii menționați ca referințe în sistemul GC/MS printr-o testare a modelului de fragmentare prin ionizare cu impact electronic, respectiv a spectrului obținut cu compusi de referința (se recomanda în aceasta calitate decafluortrifenilfosfina, DFTPP). ... 3.1.3.3. Rezolutia sistemului GC/MS, calculată ca m/DELTA m, pentru baza picului cromatografic fie pentru decafluortrifenilfosfina, fie pentru p-bromfluorbenzen și DELTA m, picul la jumatatea inaltimii, trebuie să nu depășească 10% din valoarea integrată a picului de baza. ... 3.1.3.4. Repetabilitatea care se determina ca abatere standard pentru fiecare pic caracteristic unei solutii de referința cu cel puțin sapte componenti, trebuie să fie în limitele ±10%. ... 3.1.3.5. Limita de detectie, care se determina cu o solutie de referința de metilstearat, trebuie să nu depășească cu mai mult de 5% valoarea specificata de producător. ... ... 3.1.4. Cerințele metrologice pentru HPLC 3.1.4.1. În timpul evaluarilor, sistemul HPLC trebuie să lucreze în condițiile de referința menționate la punctul 3.1.2.1 Suplimentar, producătorul trebuie să specifice tipul de pompa/pompe, compozitia fazei mobile, debitul fazei mobile, tipul de detector. ... 3.1.4.2. Pompa trebuie să asigure o presiune în domeniul (0 ... 40) MPa. ... 3.1.4.3. Pompa trebuie să asigure un debit cuprins între (0,1 ... 5,0) ml/min. ... 3.1.4.4. Pulsatiile pompei trebuie să nu depășească ±2% vârf la vârf (ca presiune), când se monitorizează sistemul cu apa, la o presiune de retur de 14 MPa, la un debit de 1 ml/min, pentru o durată de 10 minute. ... 3.1.4.5. Pentru coloanele dotate cu mijloace de control al temperaturii, temperatura coloanei trebuie să fie fixata în trepte de cate 1°C și mentinuta constanta în cadrul a ±0,1°C. ... 3.1.4.6. Limitele de detectie și domeniul liniar al detectorului/detectorilor folositi în sistemul HPLC trebuie să satisfaca cerințele de performante specificate de producător pentru produsii de incercare relevanti. În tabelul 2 Tabelul 2 Caracteristicile metrologice ale detectorilor utilizati de HPLC ... 3.1.4.7. Repetabilitatea care se determina ca abatere standard pentru fiecare pic cromatografic caracteristic unui amestec etalon de concentrație de gaze sau unei solutii de referința, trebuie să indeplineasca urmatoarele condiții de performanță: – maximum 5% pentru ariile sau inaltimile picurilor, respectiv pentru concentratiile calculate; ... – maximum 3% pentru timpul de retinere. ... ... ... ... 3.2. Cerințe tehnice Mijloacele de măsurare trebuie concepute astfel încât să se indeplineasca cerințele tehnice de mai jos: 3.2.1. Cerințe tehnice pentru GC 3.2.1.1. Tipul și puritatea gazului purtator trebuie să corespunda tipului de detector și aplicatiei specifice ... 3.2.1.2. Sistemul GC trebuie să dispună de mijloace pentru controlul și afisarea debitului gazului purtator ... 3.2.1.3. Sistemul GC trebuie să dispună de mijloace de control al temperaturilor la dispozitivul de injecție, coloană și detector ... 3.2.1.4. Trebuie specificate domeniile programabile de temperaturi și vitezele de crestere realizate în acele domenii ... 3.2.1.5. Trebuie specificate tipurile de coloane cromatografice folosite de sistem pentru aplicatiile specifice ... 3.2.1.6. Sistemul de înregistrare și prelucrare automata a datelor trebuie să ofere o înregistrare exacta, memorata și recuperabila asupra raspunsului detectorului, caracteristicilor probei, compozitiei gazului și parametrilor de debit, profilului temperaturii și alte date importante ale analizei ... ... 3.2.2. Cerințe tehnice pentru sistemul GC/MS 3.2.2.1. Trebuie specificat gazul purtător utilizat. Pe traseele de alimentare cu gaze trebuie să se prevadă un mijloc pentru îndepărtarea contaminanților gazului purtător ... 3.2.2.2. Cuptorul GC trebuie să fie adaptat atât montării coloanelor cu umplutură, cât și a celor capilare și trebuie să dispună de controlul temperaturilor programate pe parcursul analizei ... 3.2.2.3. Interfața dintre GC și MS trebuie construită din material inert și trebuie să dispună de controlul temperaturii ... 3.2.2.4. Sistemul trebuie să dispună de o sursă de ionizare cu impact electronic cu energii cuprinse între (80 ... 80) eV. O sursă de ionizare chimică poate fi utilă pentru analiza unor compuși. ... 3.2.2.5. Detectorul trebuie să fie capabil să detecteze atât ioni pozitivi, cat și ioni negativi. ... 3.2.2.6. Sistemul de procesare al datelor trebuie să fie capabil să depisteze cel puțin 6000 de spectre complete de masă ... 3.2.2.7. Sistemul de procesare al datelor trebuie să fie capabil să colecteze și să depoziteze date, după cum urmează: – prin scanare automată a ionilor specifici compusului de interes; ... – prin scanarea spectrului de mase după raportul m/z de la 40 la 500 în 0,5 s; ... – detecția până la 460 de picuri masice la un spectru. ... ... 3.2.2.8. Sistemul de procesare al datelor trebuie să poată afișa și analiza datele astfel: – să prezinte spectrele de masa sub forma de listă sau grafic de bare; ... – să integreze aria picului pentru a obține intensitatea unui fragment de masă specificată sau suma tuturor fragmentelor de masă; ... – să calculeze un spectru de mase mediu din toate spectrele masurate; ... – să identifice fisierele cu datele spectrelor de masă în concordanță cu timpul analizei (an, luna, zi, ora și minut); și ... – să identifice orice manipulare post-achiziție a datelor spectrelor de masă obținute. ... ... ... 3.2.3. Cerințe tehnice pentru HPLC 3.2.3.1. Faza mobilă trebuie să conțină reactivi chimici puri. Înainte de utilizare, faza mobilă trebuie filtrată și degazată, atunci când se impune prevenirea formării bulelor de aer în sistem. ... 3.2.3.2. Între pompă și coloană, sistemul HPLG trebuie să dispună de un monitor de presiune și de un releu limitator de presiune. ... 3.2.3.3. Trebuie să se asigure filtrarea fazei mobile în circuitele sistemului HPLC pentru indepărtarea impurităților mecanice (particule, praf etc.). ... 3.2.3.4. Coloanele trebuie să fie tubulare și cu umplutură. Materialul de construcție trebuie să fie metalic, din sticlă sau material plastic și să reziste la presiunea generată de pompă. ... 3.2.3.5. Sistemul HPLC trebuie să realizeze înregistrări exacte și fiabile ale răspunsului detectorului, funcție de timp. Trebuie să se ia în considerare sistemele de prelucrare automată a datelor cu ajutorul cărora se pot efectua analize complete, atât calitative, cât și cantitative, respectiv de integrare sau calculatoare care achiziționează și prelucrează automat datele sub formă digitală, livrând rezultatele analizei. Sistemul HPLC trebuie să corespundă în ceea ce privește aptitudinile de reglare, calibrare, afișare, înregistrare și prelucrare a informațiilor, conform instrucțiunilor din cartea tehnică. ... ... ... ... 4. Atestarea legalității 4.1. Modalitatile de control metrologic legal aplicabile gazcromatografelor și lichidcromatografelor sunt cele prevăzute în Lista oficială a mijloacelor de măsurare supuse controlului metrologic legal, în vigoare. ... 4.2. Atestarea legalității unui gazcromatograf sau lichidcromatograf se realizează numai după demonstrarea conformității acestuia cu cerințele metrologice și tehnice aplicabile prevăzute în tabelele 3 4 5 ... 4.3. Atestarea legalității se realizează prin aplicarea marcajelor și eliberarea unor documente specifice, în conformitate cu prevederile instrucțiunilor de metrologie legală în vigoare. Tabelul 3 Cerințe metrologice și tehnice aplicabile modalităților de control metrologic legal al GC Tabelul 4 Cerințe metrologice și tehnice aplicabile modalităților de control metrologic legal al GS/MS Tabelul 5 Cerințe metrologice și tehnice aplicabile modalităților de control metrologic legal al HPLC ... ... --------