NORMA SANITARĂ VETERINARA din 23 decembrie 2002 care stabileşte condiţiile de sănătate a animalelor şi cerinţele de certificare pentru importul în România din tari terţe de Crassostrea gigas, în scopul repopularii pentru purificarea apelor naţionale*) Publicat în MONITORUL OFICIAL nr. 152 bis din 10 martie 2003 -------------- Notă ... *) Aprobată prin Ordinul nr. 644/23.12.2002 publicat în Monitorul Oficial al României, Partea I, Nr. 152 din 10 martie
- Articolul 1 Autoritatea veterinara competenţa avizează importul în România din ţările enumerate la anexa nr. 1 de moluste aparţinând speciei Crassostrea gigas, în scopul repopularii pentru purificarea apelor naţionale sau reimersarii în centrele de purificare care comunică cu apele naţionale, cu condiţia sa:
- să respecte următoarele condiţii de import: a) molustele vor fi supuse, în ziua încărcării, unui control pentru a se verifica dacă îndeplinesc cerinţele stabilite la art. 3, alin.
(1)al "Normei sanitare veterinare privind condiţiile de sănătate a animalelor ce reglementează punerea pe piaţa a animalelor şi produselor de acvacultura", aprobată prin Ordinul ministrului agriculturii, alimentaţiei şi pădurilor nr. 494/27.12.2001, publicat în Monitorul Oficial al României, Partea I, nr. 191/21.03.2002; ...
- b)molustele trebuie să fi fost crescute pe parcursul întregului lor ciclu de viaţa şi sa fi fost recoltate din apele naţionale ale tarii de origine; ...
- c)molustele trebuie să fie originare dintr-o zona care a fost declarata de către autoritatea sanitară veterinara competenţa, libera de mikrocitoza şi de iridoviroza - cunoscută şi sub denumirea de boala velara a stridiilor, în conformitate cu procedurile de esantionare şi metodele de diagnostic stabilite de anexa nr. 2 şi în care nu exista nici o alta boala importanţa a molustelor bivalve, cu excepţia marteiliozei - Marteilia refrigerens - şi bonamiozei - Bonamia ostreae; ...
- d)înainte de încărcare, molustele vor fi verificate pentru absenta molustelor bivalve din alte specii, în conformitate cu procedurile stabilite de anexa nr. 3. ... 2. să fie însoţite de un certificat de sănătate al cărui model este stabilit de anexa nr. 4. Articolul 2 Autoritatea veterinara centrala a României prin Ministerul Agriculturii, Alimentaţiei şi Pădurilor, poate emite acte normative sau prevederi administrative suplimentare, pentru a se asigura implementarea prezentei norme sanitare veterinare şi conformitatea cu prevederile acesteia. Articolul 3 Anexele nr. 1, 2, 3 şi 4 fac parte integrantă din prezenta norma sanitară veterinara. Anexa 1 ------- la norma sanitară veterinara ---------------------------- Lista provizorie a ţărilor terţe din care sunt avizate activităţi de import de Crassostrea gigas destinate repopularii pentru purificarea apelor din România 1. AU Australia 2. CA Canada 3. NZ Noua Zeelanda 4. US Statele Unite ale Americii Anexa 2 ------- la norma sanitară veterinara ---------------------------- Proceduri de esantionare şi metode de diagnostic pentru declararea unei zone ca fiind libera de bolile microcitoza şi iridoviroza, produse de Mikrocystos mackini şi de Iridovirus A. TEHNICA DE PRELEVARE A PROBELOR 1. PRELEVAREA DE PROBE 1.1. Puncte de prelevare Pentru fiecare din zonele avute în vedere, trebuie să fie selectate un număr de puncte de prelevare de probe în asa fel încât sa maximizeze sansele de detectare a agenţilor patogeni. Pentru acest scop se va tine cont de parametrii care au efect asupra dezvoltării agenţilor patogeni, cum ar fi densitatea de populare, curentii de apa şi ciclul de creştere al molustelor. Pentru o zona data, cel puţin trei puncte de recoltare trebuie să fie selectate. Numărul punctelor de prelevare de probe trebuie mărit pentru zonele mari, cuprinzând mai multe locuri de cultura a speciilor în cauza. Oricând este posibil, cel puţin o prelevare de proba trebuie să fie recoltata cu substrat natural. Trebuie să fie selectate molustele care prezintă anomalii: creştere anormala, cochilii deschise. 1.2. Perioada şi frecventa de prelevare Frecventa inspecţiilor este bazată pe perioada de incubaţie şi inspecţiile trebuie să aibă loc după aceea. Perioadele de inspecţie trebuie să ţină cont de transferul molustelor care în general are loc primavara şi toamna. Prelevarea de probe trebuie să fie efectuată de doua ori pe an, primavara şi toamna, pentru Mikrocytos şi Iridovirus. 1.3. Mărimea probelor prelevate În timpul perioadei de control de doi ani care precede acordarea statutului de crescatorie autorizata, mărimea probelor prelevate pentru fiecare punct de prelevare este de 150 de moluste sau un număr suficient pentru a asigura un nivel de confidenta de 95% şi detectarea unei prevalente de 2% a purtatorilor de agenţi patogeni. 2. TRANSPORTUL PROBELOR Toate molustele prelevate trebuie să fie expediate laboratorului aprobat în timp de 24 de ore după prelevarea lor. Acestea trebuie să fie ambalate în conformitate cu normele actuale pentru a le păstra în buna stare. Pe fiecare proba trebuie să fie aplicată o eticheta care să precizeze clar locul prelevarii şi istoricul bolii - dacă exista vreunul. 3. EXAMENUL MACROSCOPIC Molustele trebuie să fie deschise cu atenţie astfel încât sa nu fie deteriorate tesuturile, în special mantaua, branhiile, inima şi glandele digestive. Trebuie să fie observate anomaliile şi leziunile tesuturilor, precum şi deformarile cochiliei, prezenta organismelor care perforeaza cochilia şi a parazitilor vizibili în manta. 4. EXAMINAREA EFECTIVELOR ÎN CARE PROCENTUL DE MORTALITATE ESTE CRESCUT Ori de câte ori procentul de mortalitate este crescut, în efectivele de moluste bivalve trebuie să se efectueze o investigatie urgenta pentru determinarea cauzei. Pe teren, o mortalitate este considerată crescută atunci când survine brusc şi între doua observaţii în cursul ciclului de reflux. În eclozionator, o mortalitate este considerată ca fiind crescută atunci când nu se obţin larve în timpul unei perioade care cuprinde pontele succesive ale mai multor reproducatori. În cresa, o mortalitate este considerată crescută atunci când survine brusc şi în mai multe tuburi. Proba prelevata trebuie să cuprindă 150 moluste bivalve şi să fie manipulata în conformitate cu tehnica definită pentru examenul histologic. Aceasta tehnica trebuie utilizata iniţial, înaintea oricărui alt tip de examen. Probele sunt fixate, de preferinta cu lichidul fixator Carson, care permite reutilizarea acestora pentru examinarea la microscopul electronic. B. METODE DE DIAGNOSTIC
- a)Mikrocytos mackini ... PREGĂTIREA ŞI EXAMINAREA PROBELOR PENTRU MIKROCITOZA 1. Examenul citologic Se efectuează o secţiune prin tesuturile cu abcese, ulcere sau pustulele verzi; se elimina excesul de apa prin plasarea probei pe o hârtie absorbanta, apoi se aplică pe o lama de sticlă proba cu secţiunea prin tesutul infectat. Lamele se usucă în aer, apoi se fixează cu metanol pentru 2-3 minute. Lamele se coloreaza utilizând orice colorant echivalent colorantului Wright - Giemsa, de exemplu Hemacolor Kit - Merk sau Diff-Quick - Baxter, în conformitate cu instrucţiunile fabricantului. Se imerseaza lamele în prima baie de colorare pentru 4-5 secunde, apoi se imerseaza imediat în a doua baie pentru 3 secunde. Se clateste cu apa de robinet, se usucă complet cu aer rece sau cald şi se include într-o rasina sintetică - Eukitt. Parazitul, cu un diametru de 1-3 æm, este vizibil în interiorul hemocitelor sau în exteriorul celulelor gazda şi are o citoplasma albastra şi un nucleu mic roşu. Este suficient un timp de observatie de 5 minute/lama. 2. Examenul histologic Pentru examenul histologic, se efectuează o secţiune prin corpul molustei cuprinzând pustulele, abcesele sau ulcerele, dacă acestea exista. Se plaseaza apoi proba într-un lichid fixator, cum ar fi fixatorul Davidson, Bouin sau Carson. Ultimul fixator enumerat permite, dacă este necesar, reutilizarea probelor pentru examen la microscopul electronic. Raportul între volumul tesutului şi volumul fixatorului nu trebuie să depăşească 1:10. Probele sunt apoi prelucrate în conformitate cu metodele histologice clasice. Mai mulţi coloranti nespecifici cum ar fi hemalaun-eozina şi colorantul tricromic al lui Masson, permit evidentierea lui Mikrocystos. Aceste exemple nu sunt exhaustive. Se recomanda examinarea a doua secţiuni pentru fiecare stridie. Stadiile de dezvoltare ale lui Mikrocystos, parazit intracelular de 2-3 æm diametru, pot fi observate în celulele tesutului conjunctiv vezicular de la periferia leziunilor, în celulele musculare şi în hemocitele din interiorul leziunilor.
- b)Iridoviroza sau boala velara a stridiilor ... PREGĂTIREA ŞI EXAMINAREA PROBELOR PENTRU IRIDOVIRUS 1. Examenul citologic Se efectuează o secţiune prin glanda digestiva şi branhii de-a lungul planului sagital; se absoarbe excesul de apa prin aplicarea unei hârtii absorbante, apoi se preseaza pe o lama de sticlă acea parte a secţiunii care trece prin organele infectate. Lamele se usucă în aer, apoi se fixează cu metanol pentru 2-3 minute. Lamele se coloreaza folosind Hemacolor Kit Merk, cu soluţia de reactiv 2 - ref. 11956 pentru o coloratie roşie şi soluţia de reactiv 3 - ref. 11957 pentru o coloratie albastra. Se imerseaza lamele în prima baie de colorare pentru 4-5 secunde, apoi se imerseaza imediat în a doua baie pentru 3 secunde. Se clateste cu apa de robinet, se usucă complet cu aer rece sau cald şi se include într-o rasina sintetică - Eukitt. Este suficient un timp de observatie de 5 minute/lama. Citoplasma celulelor infectate se coloreaza în albastru şi conţine un nucleu slab colorat în roşu şi un corp de incluzie, de mărime variabila, colorat în roşu aprins. 2. Examenul histologic Se sectioneaza masa viscerala şi branhiile cu o foarfeca mica de-a lungul planului sagital şi se plaseaza proba într-un fixator, cum ar fi fixatorul Davidson, Bouin sau Carson; ultimul fixator este indicat pentru probele care pot fi examinate mai târziu la microscopul electronic, dacă este necesar. Pentru fiecare volum de proba sunt necesare cel puţin 10 volume de fixator. Probele sunt apoi prelucrate după metodele histologice convenţionale. Mai mulţi coloranti nespecifici permit evidentierea corpusculilor iridovirali interni, cum ar fi hemalaun-eozina, colorantul tricromic al lui Masson şi alţii. Se recomanda examinarea a doua secţiuni pentru fiecare stridie. Epiteliul velar ciliat cu corpi de incluzie intracitoplasmatici (cu diametrul de 1,2 - 2,4 æm) şi care sunt sferici, densi şi bazofili în faza precoce a infectiei devin apoi neregulati şi mai puţin bazofili în forma de virioni. Corpii de incluzie apar ocazional în epiteliile velare auxiliare esofagiene şi orale, şi mai rar în epiteliul mantalei. 3. Microscopia electronică Celulele epiteliale velare cu viroplasme, observate histologic sub forma de corpi de incluzie, formează particulele virale. Particulele virale au simetrie icosaedrica, diametru 228 ± 7 mm şi o capsida compusa din două membrane cu dublu strat. Particulele virale complete poseda un miez dens, separat de capsida printr-o zona mai puţin densa. Anexa 3 ------- la norma sanitară veterinara ---------------------------- Procedurile de verificare a molustelor din specia Crassostrea gigas, înainte de încărcare 1. Autoritatea veterinara competenţa va efectua pentru fiecare lot, un examen vizual a cel puţin 1000 de stridii selectate la întâmplare, din fiecare loc de origine. 2. Lotul va fi admis dacă controlul prevăzut la pct. 1 nu pune în evidenta prezenta altor moluste decât Crassostrea gigas. Anexa 4 ------- la norma sanitară veterinara ---------------------------- MODEL CERTIFICAT DE SĂNĂTATE A ANIMALELOR pentru importul în România de moluste din specia Crassostrea gigas ANIMAL HEALTH CERTIFICATE for the importation of Crassostrea gigas into România Nota pentru importator: prezentul certificat are un caracter exclusiv sanitar veterinar iar originalul trebuie să însoţească lotul până la postul de inspecţie de frontieră la intrarea în România. Note for the importer: this certificate is only for veterinary purposes and the original must accompany the consignment until the border inspecţion post of entry into România. Număr de referinţa: .............................. Reference No: Ţara exportatoare: ............................................................ Exporting country: Serviciul oficial (minister, departament): .................................................................. Official service (Ministry, Department): I. Originea stridiilor Origin of the oysters Regiunea tarii de origine: ............................................................. Part of the country of origin: Exploatatia de origine: ............................................................. Farm of origin: Numele: ............................................................. Name: Adresa: ............................................................. Address: Expeditor: ............................................................. Consignor: II. Descrierea lotului Description of the consignment Greutate neta: ........................................................... Net weight: Numărul de unităţi: ........................................................... No of units: Mărimea medie a stridiilor: ........................................................... Medium size of the oysters: III. Destinaţia lotului Destination of the consignment Ţara de destinaţie: ........................................................... Country of destination: Locul de destinaţie: ........................................................... Place of destination: Destinatar: Consignee: Numele: ........................................................... Name: Adresa: ............................................................ Address: IV. Mijloace de transport (descriere şi identificare) Means of transport (description and identification) ............................................................ ............................................................ ............................................................ V. Atestare sanitară Health attestation Eu, subsemnatul, reprezentant al autorităţii oficiale, certific ca stridiile ce aparţin prezentului lot: I, the undersigned representative of the official authority, hereby certify that the oysters belonging to 1.- au fost examinate astăzi şi nu au prezentat nici un semn clinic de boala, - have been examined today and do not show clinical signs of disease, - nu sunt destinate distrugerii conform unui program de eradicare a unei boli, - are not intended for destruction under a scheme for the eradication of a disease - nu provin dintr-o exploatatie supusă restrictiilor din motive de sănătate a animalelor şi nu au venit în contact cu animale dintr-o astfel de exploatatie - do not come from a farm which is subject to a prohibition for animal health reasons and must not have been nn contact with animals from such a farm; 2. au fost crescute şi recoltate în apele naţionale ale tarii de origine; have been raised and harvested în the na'f7ional waters of the country of origin; 3. provin dintr-o zona care a fost declarata libera de Mikrocytos mackini şi boala velara a stridiilor, conform metodelor şi procedurilor de diagnostic stabilite în anexa numărul II la Decizia Comisiei 95/352/CE, transpusa în legislaţia naţionala ca "Norma sanitară veterinara stabilind condiţiile de sănătate a animalelor şi cerinţele de certificare pentru importul din tari terţe de Crassostrea gigas în scopul repopularii pentru purificare în apele naţionale" şi în care nu exista nici o alta boala importanţa a molustelor bivalve, alta decât marteilioza (Marteilia refringens) şi bonamioza (Bonamia ostreae); originate în a zone which has been declared free of the diseases Mikrocytos mackini and Oyster Velar Velum Disease, în accordance with the diagnostic methods and procedures laid down în Annex II of Commission Decision 95/352/EC, transposed în naţional legislation as "Sanitary veterinary norm laying down the animal health condiţions and the certification requirements for the importation from third countries into România of Crassostrea gigas for relaying în naţional waters" and în which there are no other significant diseases of bivalve molluscs other than marteiliosis (Marteilia refringens) and bonamiosis (Bonamia ostreae); 4. aparţin numai speciei Crassostrea gigas. Lotul a fost supus examinării prevăzute în anexa III la Decizia Comisiei 95/352/CE, transpusa în legislaţia naţionala ca "Norma sanitară veterinara stabilind condiţiile de sănătate a animalelor şi cerinţele de certificare pentru importul din tari terţe de Crassostrea gigas în scopul repopularii pentru purificare în apele naţionale". are only of the species Crassostrea gigas. The consignment has been subjected to the examination set out nn Annex III of Commission Decision 95/352/EC, transposed în naţional legislation as "Sanitary veterinary norm laying down the animal health condiţions and the certification requirements for the importation from third countries into România of Crassostrea gigas for relaying în naţional waters" Întocmit la ......... în data de ........................ (data încărcării) Done at Date (day of loading) Semnatura: .......................................................... Signature: Numele, cu majuscule, funcţia şi titlul oficial: .......................................................... Name în capital letters, qualification and official title: .......................................................... ┌────────┐ │Ştampila│ │ Seal │ └────────┘ --------------